腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞對(duì)胃癌EMT的相關(guān)機(jī)制研究.pdf

1、前言
　　腹膜轉(zhuǎn)移是胃癌最常見的轉(zhuǎn)移形式之一，是導(dǎo)致進(jìn)展期胃癌根治手術(shù)失敗的主要因素。深入研究胃癌腹膜轉(zhuǎn)移的發(fā)生、發(fā)展過程，闡明其分子病理學(xué)機(jī)制，是尋找合理、高效的治療靶點(diǎn)，是進(jìn)一步提高中晚期胃癌術(shù)后5年生存率的根本途徑，亦可為其它惡性腫瘤腹膜轉(zhuǎn)移的防治研究提供線索和參考。
　　胃癌腹膜轉(zhuǎn)移是特殊癌細(xì)胞克隆在適宜的腹膜微環(huán)境中生長(zhǎng)的結(jié)果。既往研究主要圍繞癌細(xì)胞開展，針對(duì)腹膜微環(huán)境改變?cè)诟鼓まD(zhuǎn)移中作用的研究甚少。
　　前

2、期實(shí)驗(yàn)我們發(fā)現(xiàn)TAMs可募集并活化循環(huán)單核細(xì)胞為M2型腹腔腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞(TAMs)。文獻(xiàn)報(bào)道，M2型TAMs可分泌多種細(xì)胞因子促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)，但其在腹膜轉(zhuǎn)移過程中的作用仍然未知。前期實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)M2型TAMs一方面可能誘導(dǎo)以腹膜間質(zhì)細(xì)胞成纖維轉(zhuǎn)化及凋亡、結(jié)締組織暴露及血管生成為主的微環(huán)境改變，因此我們推測(cè)，M2型TAMs的活化可能是腹膜轉(zhuǎn)移過程中微環(huán)境變化的核心機(jī)制。
　　EMT以上皮細(xì)胞極性的喪失及其間質(zhì)特性的獲得為主要特征，因此

3、與腫瘤細(xì)胞的原位侵襲和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移有著密切的關(guān)系。本研究擬通過體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)證實(shí)胃癌細(xì)胞可活化M2型TAMs及其比率，明確M2型TAMs誘導(dǎo)腹膜微環(huán)境改變及其促進(jìn)腹膜轉(zhuǎn)移的作用及機(jī)制，并探討其調(diào)控癌細(xì)胞EMT的分子機(jī)制。
　　材料及方法
　　1、實(shí)驗(yàn)材料:巨噬細(xì)胞系Thp，胃癌細(xì)胞系SGC-7901，BGC-823，MKN1;IL-4等巨噬細(xì)胞誘導(dǎo)劑，蛋白提取相關(guān)試劑;Westernblot實(shí)驗(yàn)相關(guān)試劑;Transwell小室;共聚

4、焦激光顯微鏡;免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)相關(guān)試劑。
　　2、實(shí)驗(yàn)方法:誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞向M2型巨噬細(xì)胞分化，將M2型巨噬細(xì)胞和胃癌MKN1細(xì)胞共培養(yǎng)，測(cè)試共培養(yǎng)后胃癌MKN1細(xì)胞EMT標(biāo)志性指標(biāo)的改變。應(yīng)用Transwell小室實(shí)驗(yàn)和裸鼠實(shí)驗(yàn)在體內(nèi)外檢測(cè)發(fā)生EMT后的胃癌細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移能力的變化。
　　結(jié)果
　　一、白介素成功誘導(dǎo)出M2型巨噬細(xì)胞
　　IL-4，IL13刺激巨噬細(xì)胞Thp，相差顯微鏡觀察懸浮細(xì)胞貼壁
　　二

5、、發(fā)現(xiàn)M2型巨噬細(xì)胞誘發(fā)胃癌細(xì)胞發(fā)生EMT改變
　　1、M2型巨噬細(xì)胞和胃癌細(xì)胞共培養(yǎng)，M2型巨噬細(xì)胞促進(jìn)胃癌細(xì)胞分散生長(zhǎng)。
　　2、M2型巨噬細(xì)胞促使胃癌細(xì)胞上皮細(xì)胞標(biāo)志蛋白E-cadherin和CK8表達(dá)降低，間質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志蛋白Fibronectin表達(dá)增加。
　　三、M2型巨噬細(xì)胞促進(jìn)胃癌細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移
　　1、M2型巨噬細(xì)胞促進(jìn)結(jié)腸癌細(xì)胞遷移及侵襲。
　　2、M2型巨噬細(xì)胞促進(jìn)胃癌細(xì)胞在裸鼠體內(nèi)發(fā)生