腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞誘導(dǎo)乳腺癌耐藥的作用及其機制研究.pdf

1、目的:探討腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞(Tumor-associated macrophages,TAM)在乳腺腫瘤細(xì)胞耐藥中的作用及其分子機制。
　　方法:1、PMA、IL-4、IL-13刺激人單核細(xì)胞白血病細(xì)胞系THP-1,運用流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞表面分子CD14、CD204、CD206的表達改變,建立TAM細(xì)胞模型;2、采用MTT法和Hoechst染色法觀察TAM細(xì)胞與乳腺腫瘤細(xì)胞T47D、BT-549直接接觸共培養(yǎng)、TAM培養(yǎng)上清與腫瘤

2、細(xì)胞共孵育體系中,TAM細(xì)胞對乳腺癌細(xì)胞系藥物耐受性的影響,進而運用Western Blot檢測TAM細(xì)胞對腫瘤細(xì)胞的STAT3、JNK磷酸化水平的影響,再用Real-Time PCR方法檢測TAM細(xì)胞對腫瘤細(xì)胞bcl-2基因表達的影響;3、通過ELISA法檢測TAM上清中IL-10含量的改變,并采用Real-Time PCR方法分析IL-10對腫瘤細(xì)胞抗凋亡基因bcl-2的調(diào)控作用,運用Western Blot檢測TAM細(xì)胞對腫瘤細(xì)胞

3、的STAT3信號通路的調(diào)控情況。
　　結(jié)果:1、經(jīng)PMA、IL-4、IL-13刺激后THP-1細(xì)胞表面CD14、CD204、CD206的表達水平增加,提示成功建立TAM細(xì)胞模型。2、TAM細(xì)胞或TAM培養(yǎng)上清與腫瘤細(xì)胞共培養(yǎng)均可顯著削弱紫杉醇對腫瘤細(xì)胞的殺傷,明顯下調(diào)其bcl-2基因表達水平以及凋亡信號JNK的磷酸化水平(p<0.05),同時顯著上調(diào)STAT3的磷酸化水平(p<0.05)。3、TAM細(xì)胞表達高水平IL-10,細(xì)胞毒

4、性分析顯示IL-10可顯著提高腫瘤細(xì)胞耐藥能力,同時上調(diào)腫瘤細(xì)胞抗凋亡基因bcl-2、抗凋亡蛋白p-STAT3的表達;若封閉TAM培養(yǎng)上清中的IL-10,腫瘤細(xì)胞的藥物敏感性顯著提高,且bcl-2表達水平下降,提示IL-10/bcl-2信號通路的激活可能是TAM細(xì)胞誘導(dǎo)耐藥的機制之一。
　　結(jié)論:本研究發(fā)現(xiàn)了TAM細(xì)胞在誘導(dǎo)乳腺癌耐藥中的重要作用,探討了IL-10介導(dǎo)的bcl-2信號通路在TAM細(xì)胞誘導(dǎo)乳腺癌耐藥作用中的關(guān)鍵作用,