化痰散結(jié)方對(duì)人乳腺癌耐藥細(xì)胞的影響及機(jī)制.pdf

1、 提 要 目的： 目的： 通過研究化痰散結(jié)方對(duì)人乳腺癌耐藥細(xì)胞株 MCF-7/ADR 耐藥相關(guān)蛋白和凋亡抑制基因表達(dá)的影響， 闡發(fā)其逆轉(zhuǎn)多藥耐藥的作用機(jī)理， 為中醫(yī)治療乳腺癌化療中普遍存在的耐藥相關(guān)問題提供理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法： 方法： 1.化痰散結(jié)方對(duì) MCF-7/ADR 細(xì)胞多藥耐藥相關(guān)蛋白及基因的研究 1)MTT 法檢測(cè)化痰散結(jié)方對(duì) MCF-7/ADR 細(xì)胞系的耐藥逆轉(zhuǎn)作用，計(jì)算耐藥逆轉(zhuǎn)倍數(shù)； 2)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)含藥血

2、清作用前后 MCF-7/ADR 細(xì)胞表面 P-gp 的表達(dá)變化； 3)免疫印跡技術(shù)檢測(cè)化痰散結(jié)方含藥血清對(duì) MCF-7/ADR 細(xì)胞中 MRP 蛋白 （多藥耐藥相關(guān)蛋白）表達(dá)的影響； 4)RT-PCR 法檢測(cè)含藥血清作用前后 MCF-7/ADR 細(xì)胞中基因 MDR1 及 MRP1 的表達(dá)變化。 2.化痰散結(jié)方對(duì)MCF-7/ADR細(xì)胞的增殖抑制和誘導(dǎo)凋亡作用 1)通過克隆形成實(shí)驗(yàn)，觀察含藥血清對(duì)細(xì)胞克隆形成的影響，計(jì)算克隆形成率；2)流式

3、細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)化痰散結(jié)方對(duì)MCF-7/ADR細(xì)胞的細(xì)胞周期的影響； 3)在熒光顯微鏡、電子顯微鏡下觀察含藥血清作用前后細(xì)胞的形態(tài)變化； 4)流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)化痰散結(jié)方對(duì) MCF-7/ADR 細(xì)胞凋亡抑制基因 Bcl-2 的影響。結(jié)果： 結(jié)果： 1.化痰散結(jié)方逆轉(zhuǎn) MCF-7/ADR 細(xì)胞多藥耐藥及機(jī)制研究 1)化痰散結(jié)方含藥血清對(duì) MCF-7/ADR 細(xì)胞的增殖有明顯抑制作用， 并隨含藥血清濃度提高、作用時(shí)間延長抑制作用增強(qiáng)。 2)化痰

4、散結(jié)方含藥血清能顯著抑制 MCF-7/ADR 細(xì)胞 P-gp 的表達(dá)，與對(duì)照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。Effect of Phlegm Sanjie on Drug Resistance Cell Lines of Human Breast Cancer and the Mechanisms Speciality：Integrative Medicine Author：Sun Changgang Tutor：Professor

5、 Qi Yuanfu ABSTRACT Objective: Study the effect of phlegm Sanjie on resistance-associated protein and apoptosis gene. Elucidate the multidrug resistance reversal mechanism. Provide theoretical and experimental basis for

6、the problem of multidrug resistance. Methods: 1. The effect of Phlegm Sanjie on MCF-7/ADR cell multidrug resistance -associated proteins and genes 1) To detect resistance reversal effect of Phlegm Sanjie on MCF-7/ADR cel

7、l by MTT assay; 2) To detect the expression of P-gp on MCF-7/ADR cell by flow cytometry after the serum containing was used; 3) To detect the expression of MRP on MCF-7/ADR cell by Western Blot; 4) To detect the express

8、ion of MDR1 and MRP1 mRNA in MCF-7/ADR cell by RT-PCR assay; 2. The proliferation and induction of apoptosis of the Phlegm Sanjie on MCF-7/ADR cell 1) By cloning experiment, we observed the effect of Phlegm Sanjie on MCF