四川部分地區(qū)藏羊源、兔源和牛源隱孢子蟲種系發(fā)育研究.pdf

1、隱孢子蟲是一種具有傳染性的專性胞內(nèi)原蟲寄生蟲。隱孢子蟲病是全世界最常見的食物和水源性疾病之一，常導致動物和人發(fā)生腹瀉。在具有免疫能力的個體內(nèi)，隱孢子蟲通常引起自身限制性腹瀉，2-3天可自行消退。然而，隱孢子蟲病卻可能威脅動物和免疫抑制人群的生命。2003年，隱孢子蟲病已經(jīng)被我國列為重點防范的兩種寄生蟲病之一。一般情況下，糞便檢查中出現(xiàn)4-6μm大小的球狀卵囊即可確診隱孢子蟲感染。但是隱孢子蟲種類的鑒定還必須結(jié)合形態(tài)學，分子生物學和宿主特

2、異性等數(shù)據(jù)共同進行分析。
　　為了解四川部分地區(qū)藏羊、兔和牛隱孢子蟲感染情況，采用飽和蔗糖溶液漂浮法對1274份糞便樣品進行檢測，包括道孚縣某養(yǎng)殖廠34份藏羊糞樣，雅安2個兔場共584份兔糞樣以及達州、宜賓、邛崍和紅原縣6個牛場共656份牛糞樣。結(jié)果表明，藏羊隱孢子蟲感染率為2.94％(1/34);兔隱孢子蟲感染率為3.6％(21/584)，1月齡以下兔感染率最高;牛隱孢子蟲感染率為2.13％(14/656)，2-6月齡牛感染率最

3、高。
　　為確定藏羊隱孢子蟲感染種類，通過巢式PCR擴增陽性分離株的18SrRNA、HSP70和CpA135位點基因，并采用限制性內(nèi)切酶SspⅠ和VspⅠ對18SrRNA產(chǎn)物進行酶切分析。同時構(gòu)建系統(tǒng)進化樹，分析藏羊感染隱孢子蟲類別。結(jié)果顯示此藏羊感染隱孢子蟲18S rRNA與C.xiaoi(GU553016)相似率為99.9％;HSP70與C.xiaoi(FJ896041)相似率為98.7％;CPA135與C.ubiquitum

4、(HM358023)相似率為99.3％。18S rRNA產(chǎn)物經(jīng)SspⅠ酶切后獲得3條條帶493 bp、262 bp和103 bp，經(jīng)VspⅠ酶切后獲得3條條帶508 bp、181bp和104bp，與C.bovis酶切條帶相似?；?8S rRNA和HSP70的系統(tǒng)發(fā)育分析顯示，該分離株與C.xiaoi親緣性最近。
　　為確定兔隱孢子蟲感染種類，通過巢式PCR擴增21份陽性分離株的18SrRNA、HSP70、CpA135、COWP和

5、GP60位點基因，同時構(gòu)建系統(tǒng)進化樹。結(jié)果顯示所有21株隱孢子蟲均為C.cuniculus。18SrRNA與C.cuniculus(GU097631)相似率達100％;HSP70與C.cuniculus(GU097646)相似率達100％，CpA135與C.cuniculus(KC157564)相似率達100％，COWP與C.cuniculus(GU097635)相似率100％，GP60顯示其亞型為VaA31。
　　為確定牛隱孢子

6、蟲感染種類，通過巢式PCR擴增14份陽性分離株的18SrRNA位點基因，并采用限制性內(nèi)切酶SspⅠ和VspⅠ對18S rRNA產(chǎn)物進行酶切分析，同時構(gòu)建系統(tǒng)進化樹。結(jié)果顯示，DZ1、DZ2與C.ryanae(HQ179574)才目似率達100％; YB1與C.andersoni(AB777194)相似率達100％，;QL1、QL3-QL5、QL8-QL11與C.andersoni(KF271480)相似率達100％; QL2、QL6、Q

7、L7與C.bovis(JX515546)相似率100％。DZ1、DZ2、QL2、QL6和QL7 SspⅠ酶切條帶約為430bp、270bp、100bp，VspⅠ酶切條帶約為620bp、115bp、105bp，與C bovis和C.ryanae酶切條帶一致; YB1、QL1、QL3-QL5和QL8-QL11 SspⅠ酶切條帶為450bp和400bp，VpⅠ酶切條帶為730bp和115bp，與C.andersoni酶切條帶一致。由此確定，D