Ezrin在小鼠附植前胚胎中的表達規(guī)律及功能.pdf

1、Ezrin在上皮細胞極化過程中發(fā)揮著重要作用，同時對細胞粘附、細胞遷移、細胞增殖、細胞信號傳導和細胞形態(tài)的維持等多種生命活動均起到重要調節(jié)作用。磷酸化修飾是調控Ezrin活性最重要的機制。目前已鑒定的調節(jié)Ezrin功能的磷酸化位點有7個。已有的研究表明小鼠卵母細胞及附植前胚胎中都有Ezrin表達，并且存在Tyr及其他氨基酸殘基的磷酸化修飾，但究竟是哪些位點發(fā)生了磷酸化？其在胚胎發(fā)育中的意義是什么？目前不得而知。本論文研究了Ezrin在小

2、鼠早期胚胎中的表達、修飾及定位規(guī)律，探討Ezrin對小鼠早期胚胎發(fā)育的影響，為進一步研究附植前胚胎發(fā)育提供了一定理論依據(jù)。
　　本試驗利用熒光定量PCR、間接免疫熒光實驗研究了ezrin在小鼠早期胚胎中的表達、修飾及定位規(guī)律，并采用siRNA干擾手段研究了ezrin對小鼠早期胚胎發(fā)育的影響。試驗分為以下3個部分：
　　1、小鼠附植前胚胎中ezrin表達規(guī)律
　　收集小鼠附植前各時期胚胎，提取總RNA進行反轉錄，以act

3、in為內參基因，以實時熒光定量PCR方法研究小鼠早期胚胎ezrin表達規(guī)律，發(fā)現(xiàn)：從原核期向囊胚發(fā)育過程中小鼠胚胎內 ezrin相對表達量呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢。在2-C期，ezrin mRNA相對表達量達到最大，極顯著高于其他發(fā)育階段的胚胎（P＜0.01），之后，隨著胚胎發(fā)育而迅速直線下降，到8-C期達到最低水平，隨后又逐漸上升，但從桑椹胚向囊胚發(fā)育時，ezrin相對表達量以再次下降。
　　2、小鼠附植前胚胎中ezrin的修飾及

4、定位規(guī)律
　　收集小鼠從原核期到囊胚期不同發(fā)育階段的胚胎，用ezrin抗體及p-ezrin(Tyr354)及 p-ezrin(Thr567)抗體進行間接免疫熒光染色，觀察小鼠早期胚胎內 ezrin磷酸化修飾情況及定位規(guī)律。結果發(fā)現(xiàn)：1）在原核期和2-細胞期胚胎中，ezrin主要定位在胞質；而從4-C到桑椹胚期，ezrin在胞質、胞核中均有定位；在囊胚期，ezrin則主要定位在細胞皮層區(qū)域；2）從原核期到囊胚期小鼠胚胎內 ezrin

5、均有部分分子發(fā)生了Tyr354磷酸化修飾，并且除原核期胚胎外，p-ezrin(Tyr354)均在細胞核內有明顯富集；3）從原核期到囊胚期小鼠胚胎內ezrin均有Thr567磷酸化修飾；在原核期胚胎和桑椹胚，p-ezrin(Thr567)主要定位在皮層區(qū)，尤其是在桑椹胚外層細胞的頂膜皮層定位最多；在2-細胞期，p-ezrin(Thr567)在卵裂球的胞質和皮層區(qū)均有分布，但在細胞接觸處明顯富集；而在4-細胞及8-細胞期胚胎中，p-ezri

6、n(Thr567)除在胞間連接處富集外，在核內也有明顯富集；在囊胚期，p-ezrin(Thr567)主要在細胞核和細胞皮層區(qū)中富集。
　　3、Ezrin在小鼠早期胚胎發(fā)育中的功能
　　收集小鼠原核期胚胎平均分成2組，試驗組注射驗證過的ezrin siRNA，對照組注射陰性 siRNA，比較兩組間胚胎發(fā)育效率及囊胚細胞總數(shù)。結果發(fā)現(xiàn)：試驗組2-細胞期、4-細胞期及8-細胞期胚胎發(fā)育率均與對照組相似，桑椹及囊胚發(fā)育率則明顯低于對