5-脫氧雜氮胞苷對小鼠附植前胚胎發(fā)育的影響.pdf_第1頁
已閱讀1頁,還剩99頁未讀, 繼續(xù)免費閱讀

下載本文檔

版權說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內容提供方,若內容存在侵權,請進行舉報或認領

文檔簡介

1、小鼠附植前胚胎發(fā)育過程中,DNA甲基化一直處于動態(tài)變化中。受精后首先雄原核在DNA復制前發(fā)生快速的主動去甲基化,第一次卵裂后,由于缺少維持DNA甲基化的酶-Dnmtl,合子基因組發(fā)生被動去甲基化直到桑椹胚,囊胚時內細胞團重新建立甲基化,而滋養(yǎng)層細胞仍然維持低甲基化狀態(tài).5-脫氧雜氮胞苷(5-AZA-CdR)是常用的去甲基化試劑,在研究胚胎發(fā)育、細胞分化、腫瘤治療等方面有重要作用.本試驗即利用5-AZA-CdR去甲基化的性能研究DNA甲基

2、化與小鼠附植前胚胎發(fā)育的關系.通過本試驗的研究不僅可以深入理解小鼠胚胎發(fā)育與DNA甲基化的關系,而且對于探討5-AZA-CdR的作用機理、為其更好的應用于腫瘤治療也有所幫助。 1. 5-AZA-CdR與小鼠附植前胚胎發(fā)育 將不同濃度的5-AZA-CdR(0.2,1.0和5.0 μM)分別從原核期胚胎、2-細胞期胚胎和4-細胞期胚胎加入,持續(xù)作用直至體外發(fā)育完畢,結果表明,從原核期加入時,0.2和1.0μM能支持胚胎發(fā)育到

3、4-細胞,5.0 μM只能支持胚胎發(fā)育到2-細胞:從2-細胞期加入時,0.2和1.0 μM能支持部分胚胎發(fā)育到8-細胞,但8-細胞不能致密化,5.0μM只能支持胚胎發(fā)育到4-細胞;從4-細胞期加入時,0.2和1.0 μM雖然能支持胚胎發(fā)育到早期桑椹胚,但卻沒有一個能夠繼續(xù)發(fā)育到囊胚,而5.0 μM處理中,也有部分發(fā)育到桑椹胚,但比例顯著低于對照組(p<0.05).綜合以上結果,表明5-AZA-CdR降低了小鼠附植前胚胎的發(fā)育能力,尤其對

4、8-細胞期以后的影響更大,并且這種影響是濃度依賴性的。 從TUNEL和Annexin-V的檢測結果看,5.0 μM 5-AZA-CdR處理得到的8-細胞和桑椹胚發(fā)生凋亡,而低濃度的5-AZA-CdR則沒有引起胚胎的凋亡,說明5-AZA-CdR引起的小鼠早期胚胎發(fā)育阻滯一定程度上與它引起的細胞凋亡有關。 2. 5-AZA-CdR與小鼠附植前胚胎的DNA甲基化 采用免疫熒光的方法檢測基因組DNA甲基化水平,并用Ima

5、ge軟件進行熒光強度的相對定量。從5-MeC免疫熒光的結果來看,5-AZA-CdR處理后,8-細胞和早期桑椹胚(致密化8-細胞)的DNA甲基化水平顯著降低(p<0.05);但2-細胞和4-細胞胚胎中DNA甲基化水平同對照組相比并沒有明顯改變(p>0.05)。 因為5-AZA-CdR引起的DNA甲基化變化是通過Dnmtl誘導的,所以對各時期胚胎中Dnmtlo的表達情況進行檢測。發(fā)現(xiàn),5-AZA-CdR處理前后Dnmtlo在2-細胞

6、和4-細胞胚胎中都只在細胞質表達;而在8-細胞和早期桑椹胚時,5-AZA-CdR處理后,Dnmtlo從細胞核中消失.說明8-細胞和早期桑椹胚DNA甲基化的降低與Dnmtlo由細胞核中消失有一定的關系.維持DNA正常甲基化對于小鼠附植前胚胎后期(8-細胞、桑椹胚和囊胚)的發(fā)育非常重要,而且正常DNA甲基化的維持必須有Dnmtlo的參與。 3. 5-AZA-CdR與發(fā)育相關基因的表達 本試驗從分子水平上探討DNA甲基化與小鼠

7、附植前胚胎發(fā)育的關系.首先采用BrUTP免疫熒光的方法從基因組整體水平上檢測轉錄活性,發(fā)現(xiàn)2-細胞和4-細胞胚胎的轉錄活性同對照相比沒有顯著差異(p>0.05),而8-細胞和早期桑椹胚的轉錄活性顯著低于對照組(p<0.05)。 進一步選取與胚胎致密化和氣穴化關系密切的基因Cx31、Cx43、Cx45、Cdh1和Ctnnbl,進行實時熒光定量PCR確定它們的mRNA表達量的變化.結果表明,5-AZA-CdR處理前后,2-細胞和4-

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內容里面會有圖紙預覽,若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權益所有人同意不得將文件中的內容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內容負責。
  • 6. 下載文件中如有侵權或不適當內容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

最新文檔

評論

0/150

提交評論