5-氮雜-2-脫氧胞苷對牛胎兒成纖維細胞和人肺癌細胞A549的影響及作用機理的研究.pdf

1、5-氮雜-2-脫氧胞苷(5-aza-dC)具有特異性抑制DNA甲基化轉移酶活性的作用，通過降低細胞內DNA甲基化水平影響基因的表達。利用5-aza-dC處理供體細胞能顯著提高體細胞核移植效率，臨床試驗也表明5-aza-dC對癌癥有一定的治療作用，但其對細胞影響的作用研究還很有限。本研究采用不同濃度的5-aza-dC處理牛胎兒成纖維細胞和人肺癌細胞A549后，對比研究了5-aza-dC對細胞增殖、細胞周期、細胞凋亡、細胞內活性氧水平的影響

2、，并通過檢測處理前后凋亡相關基因、多能基因、癌基因等表達量的變化，對5-aza-dC影響細胞的作用機理進行了研究。
　　1.5-aza-dC對牛成纖維細胞的影響
　　用0-10 mM的5-aza-dC處理牛胎兒成纖維細胞24 h、48 h后，MTT法檢測細胞活性表明，較低濃度的5-aza-dC(0-10μM)處理牛胎兒成纖維細胞，細胞活性較未處理組有一定的下降，但無顯著差異(p＞0.05);高濃度的5-aza-dC(1-10

3、 mM)對牛胎兒成纖維細胞的增殖具有明顯的抑制作用，且表現為劑量和時間依賴性(p＜0.05）。流式細胞儀檢測細胞凋亡率和細胞周期表明，5-aza-dC處理后細胞凋亡率呈濃度依賴性上升(p＜0.05);5-aza-dC將牛成纖維細胞周期阻滯于G0/G1期，且使細胞內的活性氧水平顯著性升高(p＜0.05); Real-time PCR檢測相關基因表達量的結果表明，用濃度為10mM的5-aza-dC處理牛成纖維細胞48 h后，與對照組相比，凋

4、亡基因相關BAD、 BAX、CYCS、CASPASE-3、CASPASE-9表達量顯著上升，抑凋亡基因BCL-2表達量顯著降低(p＜0.05)。
　　2.5-aza-dC對人肺癌細胞A549的影響
　　用0-10μM的5-aza-dC處理人肺癌細胞A54924 h、48 h后，MTT法檢測細胞活性表明，5-aza-dC對A549細胞的增殖具有明顯的抑制作用，且表現為劑量和時間依賴性(p＜0.05）;流式細胞儀檢測細胞凋亡率和

5、細胞周期發(fā)現，1-10μM的5-aza-dC處理人肺癌細胞A549，其凋亡率呈濃度依賴性上升（p＜0.05）;同時5-aza-dC將人肺癌細胞A549細胞周期阻滯于G2/M期，且使細胞內的活性氧水平顯著性升高(p＜0.05）;用濃度為10 mM的5-aza-dC處理人肺癌細胞A54948h后，Real-time PCR檢測相關基因表達量表明，全能基因SOX2、NANOG和癌基因ELPl3和Cer-bA表達量顯著降低;凋亡相關基因CASE

6、PASE-9的表達量顯著降低;Transwell小室檢測結果表明5-aza-dC能夠降低人肺癌細胞A549的遷移能力和侵襲能力。
　　綜上所述，5-aza-dC能夠在一定范圍內以劑量和時間依賴的方式對牛成纖維細胞和人肺癌細胞A549的增殖起抑制作用，并誘導細胞發(fā)生凋亡;5-aza-dC直接對產生細胞毒性作用或者通過影響DNA甲基化，引起細胞周期阻滯、細胞發(fā)生凋亡從而具有抗腫瘤作用;其誘導細胞凋亡機制可能與影響線粒體氧化應激，以及凋