乳腺癌NDRG-1基因甲基化及5-氮雜-2′-脫氧胞苷對(duì)T47D細(xì)胞生長(zhǎng)增殖的影響.pdf

1、摘要目的探討NDRG一1基因在乳腺癌組織中的甲基化狀態(tài)與其mRNA表達(dá)的關(guān)系，研究甲基化酶抑制劑5一氮雜一27一脫氧胞苷(5Aza一2一deoxycytidine，5Aza—CdR)對(duì)乳腺癌細(xì)胞株T47D的生長(zhǎng)增殖及NDRG—lmRNA表達(dá)的影響。方法采用RTPCR法檢測(cè)乳腺癌及癌旁組織，乳腺良性病變組織中NDRG1基因mRNA的表達(dá)情況；甲基化特異性PCR(methylationspecificPCR，MSP)法檢測(cè)乳腺癌組織、相應(yīng)癌

2、旁組織和乳腺良性病變組織NDRG1基因啟動(dòng)子甲基化狀態(tài)；5Aza—CdR處理T47D細(xì)胞后，MTT法觀察細(xì)胞生長(zhǎng)活性的變化，半定量RTPCR法檢測(cè)處理前后抑癌基因NDRG1的mRNA表達(dá)變化。結(jié)果47例癌組織中僅有20例表達(dá)NDRG—lmRNA，27例無(wú)表達(dá)，表達(dá)缺失率為574％；癌旁組織有16例表達(dá)缺失，缺失率340％，良性病變組織的NDRG—lmRNA均有表達(dá)。NDRG—l基因在47例乳腺癌組織中22例發(fā)生了甲基化，甲基化率為468

3、％，相應(yīng)癌旁組織中有10例發(fā)生甲基化，甲基化率為213％，而乳腺良性病變組織均未檢測(cè)到甲基化。結(jié)果表明，甲基化率與患者年齡和病理分級(jí)無(wú)明顯相關(guān)(PO5)，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的甲基化率(667％)比無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的甲基化率(375％)高。乳腺癌組織NDRG1基因mRNA表達(dá)陰性的27例標(biāo)本中有16例發(fā)生了甲基化，表達(dá)陽(yáng)性的20例中6例發(fā)生了甲基化。T47D細(xì)胞分別經(jīng)25、50、100umol／L濃度的5AzaCdR處理后，與對(duì)照組相比，細(xì)胞生長(zhǎng)受

4、到明顯抑制。半定量RT—PCR檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，與對(duì)照組相比，不同濃度處理組細(xì)胞的NDRG—lmRNA表達(dá)增多。結(jié)論NDRG一1基因甲基化狀態(tài)與乳腺癌發(fā)生有密切關(guān)系，異常甲基化可能是引起NDRG—lmRNA表達(dá)缺失的原因。5Aza～CdR可以逆轉(zhuǎn)T47D細(xì)胞的NDRG1基因表達(dá)，恢復(fù)該基因mRNA表達(dá)的功能，從而抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)。碩士研究生馬千會(huì)(生物化學(xué)與分子生物學(xué))指導(dǎo)教師侯琳教授關(guān)鍵詞：乳腺腫瘤；DNA甲基化；基因表達(dá)；基因；NDRGI

5、；5一氮雜一2’一脫氧胞benigndiseaseAstheresultsshowedthattherenosignificantdifferenceinmethylationfrequencieswereseenbetweenhypermethylationstatusandhistologicalgrade(／505)Hypermethylationrateswerehigherinthelymphnodemetastasistha

6、nthatofwithoutlymphnodemetastasis(667％and375％)ThenegativeexpressionofNDRG1mRNAbreastcancertissuesweredetectedhypermethylation(16／27)，whichwassignificantlydifferenttothepositivesamples(6／20)ItwasshowedthatthegrowthofT47Dc

7、ellswasrestrictedobviouslyintheexperimentgroupscomparedwithcontrolgroupAftertreatmentwith5Aza—CdR，NDRG1mRNAexpressionswereincreased，whichwerehigherthanbeforetreatmentConclusionThepromotermethylationofNDRG一1issignificantl

8、yrelatedwiththeoccurrenceofbreastcarcinoma，anditmaycontributetothelossofNDRGlmRNAexpression5一AzaCdRmayeffectivelycausereversionofNDRG—lmRNAexpression，andtreatmentwith5AzaCdRcanreactivatetheexpressionofthegeneandinhibitth