5-氮雜-2′-脫氧胞苷對(duì)人肝癌HepG2細(xì)胞中T-cadherin-β-catenin表達(dá)及細(xì)胞增殖的影響.pdf

1、目的：探討5-Aza-CdR對(duì)人肝癌細(xì)胞株HepG2細(xì)胞中T-cadherin基因啟動(dòng)子甲基化狀態(tài)改變及細(xì)胞增殖、T-cadherin/β-catenin mRNA及蛋白表達(dá)的影響。
　　方法：用5-Aza-CdR處理體外培養(yǎng)的人肝癌細(xì)胞株HepG2細(xì)胞，采用MTT法檢測(cè)不同濃度5-Aza-CdR分別作用1、2、3、4、5、6d后細(xì)胞增殖情況；采用甲基化特異性PCR(MSP)法分析藥物處理前后T-cadherin基因啟動(dòng)子CpG島

2、甲基化狀態(tài)變化；應(yīng)用RT-PCR技術(shù)及Western-blot法檢測(cè)對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組中T-cadherin/β-catenin基因mRNA及蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)果：MTT法檢測(cè)發(fā)現(xiàn)經(jīng)過不同濃度5-Aza-CdR作用后，濃度在1μmol/L以下時(shí)，細(xì)胞生長(zhǎng)曲線仍呈快速上升趨勢(shì)，當(dāng)藥物濃度上升至2μmol/L時(shí)，細(xì)胞生長(zhǎng)速度較對(duì)照組細(xì)胞明顯減慢且抑制作用具有時(shí)間、劑量依賴。4μmol/L的該藥處理HepG2細(xì)胞五天后，細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率達(dá)5

3、0.84％；MSP法檢測(cè)經(jīng)4μmol/L5-Aza-CdR處理五天的HepG2細(xì)胞，對(duì)照組T-cadherin基因啟動(dòng)子區(qū)域用甲基化引物擴(kuò)增出目的基因帶，去甲基化引物沒有擴(kuò)增出目的基因帶，即T-cadherin基因甲基化陽(yáng)性。而實(shí)驗(yàn)組T-cadherin基因用去甲基化引物擴(kuò)增出目的基因帶，但甲基化引物擴(kuò)增出目的基因帶十分弱，即提示5-Aza-CdR作用后，T-cadherin基因去甲基化陽(yáng)性。RT-PCR技術(shù)及Western-blot法

4、檢測(cè)經(jīng)4μmol/L5-Aza-CdR處理五天后的HepG2細(xì)胞，對(duì)照組T-cadherin mRNA及蛋白為陰性表達(dá)，而實(shí)驗(yàn)組HepG2細(xì)胞可檢測(cè)到T-cadherin mRNA及蛋白表達(dá)，同時(shí)β-catenin mRNA及蛋白表達(dá)水平明顯低于對(duì)照組，差別具有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　　結(jié)論：1、T-cadherin基因在人肝癌細(xì)胞株HepG2細(xì)胞中表達(dá)缺失，其與該基因啟動(dòng)子甲基化有關(guān)，可能是原發(fā)性肝癌發(fā)生發(fā)展的原因之