5-脫氧雜氮胞苷對人肝癌HepG2細(xì)胞PTEN和磷酸化AKT基因表達(dá)的影響.pdf

1、目的：
　　觀察5-脫氧雜氮胞苷(5-Aza-2'-deoxycytidine，5-Aza-CdR)對肝癌HepG2細(xì)胞PTEN及Akt信號通路的影響，從而為其在肝癌發(fā)生、發(fā)展過程中的作用提供依據(jù)。
　　方法：
　　乳酸脫氫酶釋放實驗檢測不同濃度5-Aza-CdR對HepG2細(xì)胞胞毒性作用，隨后用終濃度為0.4、1.6、6.4、25.6、102.4μmol/L5-Aza-CdR作用24h、48h、72 h。采用MTT法

2、測細(xì)胞生長抑制率；RT-PCR檢測5-脫氧雜氮胞苷對磷酸酯酶和張力蛋白同源物基因（phosphatase and tensin homolog，PTEN） mRNA表達(dá)的影響；甲基化特異性PCR（methylation-specific PCR，MSP）檢測PTEN基因啟動子區(qū)域甲基化狀態(tài)；Western Blot檢測5-aza-CdR對PTEN、磷酸化AKT（p-AKT）的影響。
　　結(jié)果：
　　1.乳酸脫氫酶釋放實驗顯示

3、，0～102.4μmol/L5-Aza-CdR對HepG細(xì)胞LDH漏出率無明顯影響（P>0.05）。MTT法檢測顯示,終濃度為0.4μmol/L、1.6μmol/L、6.4μmol/L、25.6μmol/L、102.4μmol/L的5-Aza-CdR作用人肝癌HepG2細(xì)胞72h后，細(xì)胞生長抑制率分別為(18.32±3.87)％、(38.15±1.72)%、(47.67±0.47)%、(63.41±1.34)%和(71.88±2.04)

4、%，并存在時間和濃度依賴關(guān)系，組間比較經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析，P<0.05；
　　2. RT-PCR結(jié)果顯示,5-Aza-CdR能以濃度和時間依賴方式誘導(dǎo)肝癌HepG2細(xì)胞PTEN mRNA表達(dá)，灰度掃描結(jié)果顯示，組間比較，P<0.05；
　　3. Western blot證實，5-Aza-CdR也能誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞PTEN蛋白表達(dá)，并呈一定的劑量依賴性（P<0.05）；
　　4. MSP結(jié)果顯示，5-Aza-CdR能降低甲基