穿通支原體藥物敏感性分析.pdf

1、目的：穿通支原體(Mycoploamapenetrans，M.penetrans)是首次從艾滋病(AIDS)患者尿中分離檢出的一種新的致病性支原體，繼之，1999年Yánez從原發(fā)性抗磷脂綜合征病人的體液中分離到穿通支原體。我們的研究曾發(fā)現(xiàn)在IgA腎病患者的血液、尿液、咽拭子及腫瘤病人的腫瘤組織和血液標(biāo)本中M.penetrans有很高的分離率。本研究旨在研究分離自IgA腎病、腫瘤病人的穿通支原體體外藥物敏感性。 方法：

2、1、MPe菌株的分離與鑒定：取經(jīng)處理的IgA腎病的血液、尿液、咽拭子，腫瘤病人的腫瘤組織和血液標(biāo)本用4種培養(yǎng)基對比培養(yǎng)，將產(chǎn)酸、變黃的可疑陽性培養(yǎng)物過濾、轉(zhuǎn)種于MPe固體培養(yǎng)基，經(jīng)培養(yǎng)3-4天后置光學(xué)顯微鏡下觀察菌落，發(fā)現(xiàn)油煎蛋樣菌落，與標(biāo)準(zhǔn)菌株對照，證實(shí)支原體生長，注意與L型細(xì)菌相鑒別。進(jìn)一步應(yīng)用生化反應(yīng)試驗(yàn)、套式PCR和核酸序列測定等方法進(jìn)行鑒定。 2.試驗(yàn)菌株的選定：隨機(jī)抽取分離自腫瘤病人血液或腫瘤組織30株MPe(分離自

3、膀胱移行細(xì)胞癌18株，胃癌10株，宮頸癌2株)以及分離自IgA腎病的血液、尿液、咽拭子的15株MPe進(jìn)行藥物敏感性試驗(yàn)。 3.Mpe菌株的復(fù)活：將冰凍保存于-20℃的MPe，接種于SP4液體培養(yǎng)基，置37℃孵育4～5天，培養(yǎng)基顏色變黃、澄清，并與已知MPe標(biāo)準(zhǔn)菌株(GTU-54-6Al)相比較確認(rèn)后，收集菌株。 4.抗菌藥物準(zhǔn)備：抗菌藥物稀釋參照文獻(xiàn)[6,7]操作。參照NCCLS操作方法用金黃色葡萄球菌(ATCC2921

4、3)和大腸埃希菌(ATCC25922)驗(yàn)證配制的抗菌藥物濃度。 5.MPe試驗(yàn)株液相改變單位(CCU)和菌落形成單位(CFU)的選定：取試驗(yàn)菌株，選定CCU跟CFU。 6.MPe試驗(yàn)株最小殺菌濃度(MBCs)和最小抑菌濃度(MICs)測定：MBCs(Minimalbactericidalconcentration)測定采用微量法(96孔)，MICs(Minimalinhibitoryconcentrations)，采用平

5、板法，參照文獻(xiàn)[6,7]操作進(jìn)行。 結(jié)果：30株分離自腫瘤患者的MPe的結(jié)果：MICs以克林霉素和左旋氧氟沙星最低(0.078μg/ml)，其它依次為：環(huán)丙沙星(0.156μg/ml)、紅霉素(0.156μg/ml)、氯霉素(0.312μg/ml)、氧氟沙星(8μg/ml)、慶大霉素(10μg/ml)。MBCs最低的是克林霉素和左旋氧氟沙星(0.156μg/ml)。15株分離自IgA腎病的MPe的結(jié)果：各種藥物對MPe的MICs