JWA與α-微管蛋白結(jié)合的結(jié)構(gòu)和功能關(guān)系研究.pdf

1、該課題組用多種分子和細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)手段證實(shí)JWA蛋白與微管蛋白β亞單位緊密結(jié)合,在細(xì)胞內(nèi)與其分布基本平行,并在對環(huán)境物理化學(xué)因素的應(yīng)答(聚合或解聚)中表現(xiàn)出與微管(β亞單位)同步的動力學(xué)變化,并可能參與細(xì)胞有絲分裂過程.JWA基因受多種分化誘導(dǎo)劑如維甲酸(RA)、13順-維甲酸(13-cRA)和佛波酯(TPA)等調(diào)控,參與急慢性白血病細(xì)胞分化和凋亡,以及細(xì)胞對環(huán)境熱應(yīng)激、氧化應(yīng)激應(yīng)答的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路.除此以外,國外學(xué)者和該課題組的研究還發(fā)

2、現(xiàn),JWA基因參與調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)氨基酸的平衡,尤其對谷氨酸(興奮性氨基酸)和?；撬?抑制性氨基酸)具有特別顯著的調(diào)節(jié)作用.對調(diào)控機(jī)制的初步研究結(jié)果表明,JWA的作用可能與細(xì)胞內(nèi)PKC相關(guān)的信號通路以及鈣穩(wěn)態(tài)的改變有關(guān).該課題是在課題組對JWA基因研究積累的基礎(chǔ)上,進(jìn)一步探討JWA基因與微管蛋白α-亞單位(或稱α-微管蛋白)的結(jié)構(gòu)和功能關(guān)系.研究內(nèi)容分為二個部分:一,JWA蛋白與α-微管蛋白的細(xì)胞內(nèi)共定位;二,JWA蛋白參與調(diào)節(jié)細(xì)胞有絲分裂過

3、程及微管動力學(xué)的機(jī)制.第一部分JWA蛋白與α-微管蛋白的細(xì)胞內(nèi)共定位該課題組以往的研究工作已證實(shí)JWA蛋白和β-微管蛋白可被免疫共沉淀、兩者在細(xì)胞內(nèi)分布平行、對作用于微管的藥物(秋水仙素和諾考達(dá)唑)的反應(yīng)和及所引起的結(jié)構(gòu)變化也基本一致.為進(jìn)一步探討JWA蛋白是否和微管的另一亞單位α-微管蛋白也有類似的結(jié)構(gòu)和功能關(guān)系,該研究分別用抗JWA多克隆抗體和抗α-微管蛋白單克隆抗體對經(jīng)微管解聚劑(2×10<'-5>mol·L<'-1>諾考達(dá)唑)處

4、理及對照的PC12細(xì)胞裂解液進(jìn)行免疫共沉淀,然后用Western blot檢測各沉淀物中是否含有JWA蛋白.第二部分JWA蛋白參與調(diào)節(jié)細(xì)胞有絲分裂過程及微管動力學(xué)的機(jī)制為深入了解JWA蛋白在微管動力學(xué)變化中的作用或調(diào)節(jié)機(jī)制,該研究進(jìn)一步探討了JWA蛋白在各細(xì)胞周期中的變化.用0.5％小牛血清處理36h,2×10<'-6>mol·L<'-1>羥基脲處理16h,1×10<'-5>mol·L<'-1>諾考達(dá)唑處理2h使PC12細(xì)胞分別停滯于G