微管蛋白破壞對軟骨細胞代謝功能的影響.pdf

1、目的：探討微管蛋白破壞對體外關節(jié)軟骨細胞代謝功能的影響。
　　 方法：2月齡新西蘭大白兔8只,處死后取雙膝關節(jié)全層軟骨,采用常規(guī)0.4％Pronase酶和0.025％Ⅱ型膠原酶依次消化為軟骨細胞培養(yǎng)3天貼壁后,分為對照組和實驗組,對照組繼續(xù)用原代培養(yǎng)基（90％DMEM/F12+10％胎牛血清）培養(yǎng),實驗組在原代培養(yǎng)基中加入微管蛋白破壞劑秋水仙素（終濃度為0.1μmol/l）。加藥后第1、2天用Annexin-Ⅴ/PI 流式細胞術

2、檢測軟骨細胞早期凋亡率,加藥后第6天細胞爬片HE 染色觀察細胞形態(tài)的改變,加藥后第3、6、9天取細胞用實時定量熒光反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈式反應（ReAlt ime RT-PCR）法測定軟骨細胞Ⅱ型膠原、蛋白多糖以及MMP-13 mRNA的表達量。
　　 結果：實驗組第2天軟骨細胞早期凋亡率明顯高于對照組(P<0.05)；與對照組比較,實驗組第6天軟骨細胞呈不規(guī)則多角形,胞核深染且分裂相增多,細胞基質(zhì)減少,實驗組第3、6、9天軟骨細胞Ⅱ型