骨橋蛋白對(duì)體外培養(yǎng)人OA軟骨細(xì)胞MMP-1影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、研究背景和目的：
　　隨著我國老齡化社會(huì)的到來，越來越多的人罹患骨關(guān)節(jié)炎疾病。因此，骨性關(guān)節(jié)炎的治療已成為現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究的重點(diǎn)。骨關(guān)節(jié)炎的發(fā)病機(jī)制涉及多方面，其中基質(zhì)金屬蛋白酶-1(MMP-1)對(duì)軟骨細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）的降解起著重要作用。
　　骨橋蛋白（OPN）是一種糖基化磷酸蛋白，廣泛存在人體組織中，對(duì)骨代謝、炎癥反應(yīng)、腫瘤發(fā)生轉(zhuǎn)移及免疫調(diào)節(jié)等生理病理過程有重要意義。在骨關(guān)節(jié)炎患者的關(guān)節(jié)液，滑膜，軟骨中均發(fā)現(xiàn)OPN含量較正

2、常人明顯增高。但又有研究顯示，敲除OA大鼠OPN基因后，可導(dǎo)致OA模型病變加劇，提示OPN在骨性關(guān)節(jié)炎的發(fā)病過程中起著重要作用。
　　本研究擬通過體外培養(yǎng)骨性關(guān)節(jié)炎患者的軟骨細(xì)胞，檢測(cè)不同濃度OPN對(duì)軟骨細(xì)胞MMP-1的影響。初步探討OPN在骨關(guān)節(jié)炎中的作用，為將來靶向治療骨關(guān)節(jié)炎提供一種新的思路。
　　第一部分軟骨細(xì)胞的分離及鑒定
　　目的：分離、鑒定軟骨細(xì)胞。
　　方法：運(yùn)用兩步酶消法將全膝關(guān)節(jié)置換術(shù)后的軟骨

3、組織分離，消化，培養(yǎng)。然后制成細(xì)胞爬片，通過Ⅱ型膠原免疫組化染色檢測(cè)細(xì)胞。
　　結(jié)果：倒置相差顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)正常，呈橢圓形，臺(tái)盼藍(lán)染色存活率高；細(xì)胞爬片Ⅱ型膠原免疫組化染色細(xì)胞胞漿及周圍有黃棕色顆粒，證實(shí)為Ⅱ型膠原，具有軟骨細(xì)胞表型特征。
　　結(jié)論：應(yīng)用兩步酶消法，分離培養(yǎng)的OA軟骨細(xì)胞可滿足實(shí)驗(yàn)要求。
　　第二部分不同濃度OPN對(duì)OA軟骨細(xì)胞MMP-1的影響
　　目的：探討不同溶度OPN對(duì)OA軟骨細(xì)胞MM

4、P-1的影響
　　方法：1、培養(yǎng)OA患者的軟骨細(xì)胞；2、取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的第二代OA軟骨細(xì)胞，分為4組：1.空白對(duì)照組；2.OPN1ng/ml組；3. OPN2ng/ml組；4. OPN4ng/ml組。48小時(shí)后收集OA軟骨細(xì)胞檢測(cè)MMP-1 mRNA的相對(duì)表達(dá)量和MMP-1蛋白的相對(duì)表達(dá)量；收集細(xì)胞上清液檢測(cè)MMP-1蛋白的表達(dá)量。
　　結(jié)果：當(dāng)OPN溶度為1ng/ml，2ng/ml，4ng/ml時(shí)均比空白對(duì)照組MMP-1表達(dá)