內(nèi)源性大麻素系統(tǒng)參與尼古丁預(yù)處理對(duì)局灶性腦缺血損傷的神經(jīng)保護(hù)效應(yīng).pdf

1、流行病學(xué)研究發(fā)現(xiàn)吸煙人群阿爾茨海默病(Alzhemer’s disease,AD)和帕金森氏病(Parkinson’s disease,PD)的發(fā)病率較低。近年來(lái)的一些細(xì)胞及動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn),尼古丁可以對(duì)抗N-甲基D-天冬氨酸受體(N-methyl-D-aspartate receptor,NMDAR)介導(dǎo)的細(xì)胞毒性作用,可以延緩神經(jīng)生長(zhǎng)因子(Nerve Growth Factor,NGF)剝奪所引起的P12細(xì)胞死亡,可以對(duì)抗甲基苯丙胺

2、引起的多巴胺能神經(jīng)元變性,提高紋狀體內(nèi)多巴胺的含量,改善自發(fā)性運(yùn)動(dòng)行為。這些研究提示煙草中的尼古丁可能具有神經(jīng)保護(hù)效應(yīng)。此外,大麻素受體拮抗劑可以對(duì)抗長(zhǎng)期攝取尼古丁后的行為學(xué)改變,尼古丁長(zhǎng)期作用于機(jī)體可以引起腦中內(nèi)源性大麻素含量升高。提示尼古丁與內(nèi)源性大麻素系統(tǒng)具有交互作用。已有證據(jù)表明內(nèi)源性大麻素系統(tǒng)的激活在神經(jīng)缺血損傷等過(guò)程中具有保護(hù)作用,因此,我們推測(cè)尼古丁預(yù)處理可能通過(guò)影響內(nèi)源性大麻素系統(tǒng)起到神經(jīng)保護(hù)作用。
　　本研究采用

3、大鼠大腦中動(dòng)脈阻閉(Middle Cerebral Artery Occlusion,MCAO)模型,研究尼古丁預(yù)處理能否對(duì)大鼠局灶性缺血/再灌注(Ischemia/Reperfusion,I/R)損傷起到保護(hù)作用,并探討其可能機(jī)制,為臨床應(yīng)用藥物預(yù)處理的方式提供新的理論依據(jù)。本研究由四個(gè)實(shí)驗(yàn)組成:
　　一、尼古丁預(yù)處理對(duì)大鼠局灶性I/R損傷的保護(hù)作用;
　　二、CB1受體拮抗劑AM251減弱尼古丁預(yù)處理的神經(jīng)保護(hù)作用;

4、r>　　三、給予尼古丁后腦內(nèi)大麻素(2-AG、AEA)的含量變化;
　　四、給予尼古丁后腦內(nèi)大麻素受體(CB1)的變化。
　　實(shí)驗(yàn)一尼古丁預(yù)處理對(duì)大鼠局灶I(lǐng)/R損傷的保護(hù)作用
　　方法:30只雄性SD大鼠,體重280-320g,隨機(jī)分為3組(n=10):MCAO組;Nicotine+MCAO組:在MCAO前2h以1.2mg/kg經(jīng)腹腔注射尼古丁酒石酸鹽溶液;TA+MCAO組:在MCAO前2h以0.4mg/kg經(jīng)腹腔注射

5、酒石酸溶液。各組動(dòng)物以線栓法行大腦中動(dòng)脈阻閉2h,再灌注后24h后采用Garcia法進(jìn)行神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分,評(píng)分后斷頭取腦,取腦組織冠狀切片行TTC染色,以測(cè)量腦梗死容積百分比。
　　結(jié)果:與MCAO組相比Nicotine+MCAO組動(dòng)物的神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分明顯升高(P＜0.05),梗死容積百分比明顯降低(P＜0.05)。MCAO組和TA+MCAO組間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。
　　結(jié)論:尼古丁預(yù)處理對(duì)大鼠局灶性腦缺血/再灌注損

6、傷具有神經(jīng)保護(hù)作用。
　　實(shí)驗(yàn)二CB1受體拮抗劑AM251減弱尼古丁預(yù)處理的神經(jīng)保護(hù)作用
　　方法:40只雄性SD大鼠(280-320g),隨機(jī)分為5組(n=8):MCAO組;Nicotine+MCAO組:在MCAO前2h以1.2mg/kg經(jīng)腹腔注射尼古丁酒石酸鹽溶液;AM251+Nicotine+MCAO組:尼古丁酒石酸鹽溶液注射前30min以10mg/kg經(jīng)腹腔注射AM251;Vehicle(溶劑,AM251溶于其中)+

7、Nicotine+MCAO組:給與尼古丁酒石酸鹽溶液前30min經(jīng)腹腔注射溶劑;AM251+MCAO組:MCAO前2.5h以10mg/kg經(jīng)腹腔注射AM251。各組動(dòng)物以線栓法行大腦中動(dòng)脈阻閉2h再灌注24h后,采用Garcia神經(jīng)行為評(píng)分及腦梗死容積百分比評(píng)定預(yù)處理效果。
　　結(jié)果:與Nicotine+MCAO組相比,AM251+Nicotine+MCAO組的神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分明顯降低(P＜0.05),腦梗死容積百分比升高(P＜0.

8、05)。Nicotine+MCAO組和Vehicle+Nicotine+MCAO組間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。與MCAO組相比,AM251+Nicotine+MCAO組的神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分較高(P＜0.05),腦梗死容積百分比較低(P＜0.05)。MCAO組和AM251+MCAO組間亦無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。
　　結(jié)論:大麻素受體拮抗劑AM251可以部分逆轉(zhuǎn)尼古丁預(yù)處理對(duì)大鼠局灶性腦缺血/再灌注損傷的神經(jīng)保護(hù)作用。
　

9、　實(shí)驗(yàn)三給予尼古丁后腦中內(nèi)源大麻素(2-AG、AEA)的含量變化
　　方法:54只雄性SD大鼠(280-320g),隨機(jī)分為9組(n=6):Sham組,0.5h TA組,0.5h Nicotine組,1h TA組,1h Nicotine組,2h TA組,2h Nicotine組,3h Nicotine組,3h TA組。各組動(dòng)物在腹腔注射后的指定時(shí)間斷頭取右側(cè)腦組織,以液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用分析方法觀察內(nèi)源性大麻素2-AG及AEA的含量

10、變化。
　　結(jié)果:與Sham組相比,腹腔注射尼古丁酒石酸鹽溶液0.5h后腦中內(nèi)源性大麻素(2-AG和AEA)含量未見明顯變化;1h后內(nèi)源性大麻素含量明顯增加;2h后內(nèi)源性大麻素含量達(dá)到高峰;3h后內(nèi)源性大麻素含量下降基礎(chǔ)水平。而TA組中內(nèi)源性大麻素含量在各時(shí)間點(diǎn)與Sham組相比沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　結(jié)論:尼古丁可以引起大鼠腦中內(nèi)源性大麻素(2-AG和AEA)含量增加。
　　實(shí)驗(yàn)四給予尼古丁后腦中內(nèi)源大麻素受體(CB1)

11、的變化
　　方法:56只雄性SD大鼠(280-320g),隨機(jī)分為7組(n=8):Sham組,2h TA組,2h Nicotine組,4h TA組,4h Nicotine組,6h TA組,6h Nicotine組。各組動(dòng)物在腹腔注射后的指定時(shí)間點(diǎn)斷頭取腦,以Western Blot方法分析腦內(nèi)源性大麻素受體CB1的含量。另取9只雄性SD大鼠(280-320g),隨機(jī)分為3組(n=3):Sham組,6h TA組,6h Nicotin

12、e組,在藥物注射6h后,按我科以前報(bào)道的方法在麻醉狀態(tài)下經(jīng)心臟灌注含4％多聚甲醛的磷酸緩沖鹽溶液,制作腦組織冠狀切片(10μm),行CB1受體免疫熒光染色。
　　結(jié)果:腦內(nèi)源性大麻素受體CB1在尼古丁酒石酸鹽溶液注射后6h升高(P＜0.05),其余各組之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。免疫組化結(jié)果顯示Sham組及6h TA組內(nèi)僅觀察到少量CB1受體,6h Nicotine組在可觀察到較多的CB1受體表達(dá)。
　　結(jié)論:尼古丁可