急性出血壞死性胰腺炎肺損傷發(fā)病機(jī)制及中藥治療的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、論文一磷脂酶A<,2>對大鼠Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞的損傷作用研究.目的：急性出血壞死性胰腺炎(AHNP)時(shí)血中增多的磷脂酶A<,2>(PLA<,2>)對Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞的損傷作用是引起胰腺炎肺損傷的重要因素.該研究對大鼠Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞進(jìn)行分離純化和原代培養(yǎng),并在體外研究了PLA<,2>及含有PLA<,2>的AHNP大鼠血清對培養(yǎng)細(xì)胞的損傷作用及機(jī)理.方法對大鼠Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞進(jìn)行分離純化和原代培養(yǎng),分別加入PLA<,2>及含有PLA<,2>

2、的AHNP大鼠血清,并設(shè)PLA<,2>抑制劑(鹽酸阿的平)對照組,各組均孵育4h,離心收集細(xì)胞,破碎細(xì)胞核提取核蛋白,ELISA法測定NF-κ B活性;測定培養(yǎng)上清液中乳酸脫氫酶(LDH)活性,另外對培養(yǎng)細(xì)胞進(jìn)行透射電鏡檢查,觀察PLA<,2>對肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞的損傷作用.結(jié)論：AHNP時(shí),PLA<,2>對Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞的損傷作用是造成胰腺炎肺損傷的重要因素;這種損傷作用除了與其對Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞的直接損傷作用有關(guān)外,還與其激活NF-

3、κ B的表達(dá)有關(guān).論文二：磷脂酶A<,2>與NF-κB活化在大鼠急性壞死性胰腺炎肺損傷中的作用.目的：探討磷脂酶A<,2>與NF-κ B活化在大鼠急性壞死性胰腺炎肺損傷中的作用.方法：健康Wistar大鼠108只,體重250-290g,隨機(jī)分為3組:假手術(shù)組(36只)、模型組(36只)、PLA<,2>抑制劑組(36只).假手術(shù)組只開腹翻動(dòng)腹腔臟器數(shù)次即關(guān)腹;模型組經(jīng)膽胰管逆行注射5％?；悄懰徕c(1ml/kg,0.1ml/min)誘發(fā)急性

4、出血壞死性胰腺炎,PLA<,2>抑制劑組在造模后30min經(jīng)尾靜脈注射quinacrine(5mg/kg),造模方法與模型組相同.3組動(dòng)物分別隨機(jī)分為3h、6h、12h三組(每組8只),其余12只用于觀察24小時(shí)死亡率.于3個(gè)時(shí)間點(diǎn),麻醉狀態(tài)下經(jīng)腹主動(dòng)脈取血,測定血清淀粉酶、脂肪酶、PLA<,2>、TNF<,α>、IL-1、IL-6;抽取腹水,測定淀粉酶、脂肪酶、PLA<,2>;取左肺一部分勻漿,測定MPO、PLA<,2>、TNF α、

5、IL-l、IL-6,一部分提取核蛋白,蛋白印跡法檢測NF-κ B表達(dá),一部分經(jīng)10％甲醛同定作病理組織學(xué)檢查,取右肺進(jìn)行肺泡灌洗,分離收集并純化肺泡巨噬細(xì)胞,提取核蛋白后采用化學(xué)發(fā)光ELISA法檢測NF-κ B(P<'65>)的表達(dá)情況;留取胰腺組織進(jìn)行組織病理學(xué)觀察.結(jié)論：PLA<,2>在急性壞死性胰腺炎肺損傷中起重要作用;PLA<,2>可以通過激活肺組織及肺泡巨噬細(xì)胞NF-κ B,上調(diào)多種細(xì)胞因子的表達(dá)而產(chǎn)生肺損害作用;阻斷磷脂酶A

6、<,2>可以有效地減輕胰腺炎肺損傷.論文三清胰湯對急性出血壞死性胰腺炎肺損傷的治療機(jī)理研究.目的：研究清胰湯對急性出血壞死性胰腺炎肺損傷的治療機(jī)理.方法：健康wistar大鼠180只,隨機(jī)分為5組:假手術(shù)組(36只)、模型組(36只)、清胰湯組(36只)、善寧組(36只)、NF-κ B抑制劑組(36只).假手術(shù)組只開腹翻動(dòng)腹腔臟器數(shù)次即關(guān)腹;模型組經(jīng)膽胰管逆行注射5％牛磺膽酸鈉(1ml/kg,0.1ml/min)誘發(fā)急性出血壞死性胰腺炎

7、;清胰湯組在造模后30min灌胃清胰湯(10ml/kg);善寧組在造模后30min皮下注射善寧(50 μ g/kg);NF-κ B抑制劑組在造模后30min經(jīng)尾靜脈注射PDTC(120mg/kg).5組動(dòng)物分別隨機(jī)分為3h、6h、12h三組(每組8只),其余12只用于觀察24小時(shí)死亡率.于3個(gè)時(shí)間點(diǎn),麻醉狀態(tài)下經(jīng)腹主動(dòng)脈取血,測定血清淀粉酶、脂肪酶、PLA<,2>、TNF<,α>、IL-1、IL-6;抽取腹水,測定淀粉酶、脂肪酶、PLA

8、<,2>;取左肺一部分勻漿,測定MP0、PLA<,2>、TNF<,α>、IL-1、IL-6,一部分提取核蛋白,化學(xué)發(fā)光ELISA法檢測NF-κ B表達(dá),一部分經(jīng)10％甲醛固定作病理組織學(xué)檢查,取右肺進(jìn)行肺泡灌沈,分離收集并純化肺泡巨噬細(xì)胞,提取核蛋白后采用化學(xué)發(fā)光ELISA法檢測NF-κ B(P65)的表達(dá)情況;留取胰腺組織進(jìn)行組織病理學(xué)觀察.結(jié)論：清胰湯可通過其多途徑多靶點(diǎn)作用,抑制PLA<,2>活性,抑制肺組織及肺內(nèi)炎癥相關(guān)細(xì)胞的N

9、F-κ B活化,下調(diào)多種細(xì)胞因子表達(dá),減輕肺及其它器官的損害,降低死亡率.論文四粉防己堿對急性出血壞死性胰腺炎肺損傷治療機(jī)理研究.目的：觀察粉防己堿對實(shí)驗(yàn)性急性出血壞死性胰腺炎肺損傷大鼠的治療作用,并對其作用機(jī)理進(jìn)行探討.方法：取Wistar大鼠108只,隨機(jī)分為假手術(shù)組、模型組、粉防己堿組.經(jīng)膽胰管逆行注射牛磺膽酸鈉復(fù)制急性出血壞死性胰腺炎模型,在造模后30min經(jīng)尾靜脈注射粉防己堿(120mg/kg),術(shù)后3h、6h、12h取血,測

10、定血清淀粉酶、脂肪酶、PLA<,2>、TNF α、IL-1、IL-6;記錄腹水量,測定腹水淀粉酶、脂肪酶、PLA2;取左肺一部分勻漿,測定MPO、PLA<,2>、TNF<,α>、IL-1、IL-6,一部分經(jīng)10％甲醛固定作病理組織學(xué)檢查,取右肺進(jìn)行肺泡灌洗,分離收集并純化肺泡巨噬細(xì)胞,提取核蛋白后采用化學(xué)發(fā)光ELISA法檢測NF-κ B(P65)活性;留取胰腺組織進(jìn)行組織病理學(xué)檢查;觀察各組24小時(shí)死亡率.結(jié)論：粉防己堿可顯著抑制PLA

11、<,2>的激活,進(jìn)而抑制NF-κ B的活化,下調(diào)多種細(xì)胞因子的表達(dá),抑制"細(xì)胞因子風(fēng)暴"的產(chǎn)生,減輕對肺組織的損害作用.論文五川芎嗪對急性出血壞死性胰腺炎肺損傷治療機(jī)理研究.目的：觀察川芎嗪對實(shí)驗(yàn)性急性出血壞死性胰腺炎肺損傷大鼠的治療作用,并對其作用機(jī)理進(jìn)行探討.方法：取Wistar大鼠108只,隨機(jī)分為假手術(shù)組、模型組、川芎嗪組3組.經(jīng)膽胰管逆行注射5％牛磺膽酸鈉(1ml/kg體重,0.1ml/min)復(fù)制急性出血壞死性胰腺炎模型,在

12、造模后30min經(jīng)尾靜脈注射川芎嗪(80mg/kg),術(shù)后3h、6h、12h取血,測定血清淀粉酶、脂肪酶、PLA<,2>、TNF<,α>、IL-1、IL-6;記錄腹水量,測定腹水淀粉酶、脂肪酶、PLA<,2>;取左肺一部分勻漿,測定MPO、PLA<,2>、TNF<,α>、IL-1、IL-6,一部分經(jīng)10％甲醛固定作病理組織學(xué)檢查,取右肺進(jìn)行肺泡灌洗,分離收集并純化肺泡巨噬細(xì)胞,提取核蛋白后采用化學(xué)發(fā)光ELISA法檢測NF-κ B(P65