雞腸Remak神經超微結構及其遞質的研究.pdf

1、哺乳動物的腸神經系統(tǒng)(ENS)分布在腸壁中，是自主神經系統(tǒng)的第三個組成部分，能獨立完成各種反射活動。與哺乳動物不同，禽類由于有腸Remak神經(INR)的存在，其ENS不僅包括腸壁內的神經結構，還包括腸壁外的INR。INR由薦部神經嵴細胞衍生遷移而來，是禽類特有的一根在背腸系膜底緣中與腸管平行分布，從泄殖腔一直延伸到十二指腸的自主神經節(jié)鏈，并發(fā)出許多神經分支支配到腸管壁、泄殖腔、法氏囊、睪丸、卵巢和榆卵管。本文應用電鏡技術、免疫組織化學

2、和原位雜交的方法，從不同角度對雞INR的結構、性質及神經遞質進行了較為系統(tǒng)的研究。 試驗I.NR的超微結構研究本試驗用戊二醛對INR進行固定，然后用透射電鏡系統(tǒng)觀察了雞INR的超微結構特點。結果顯示空回腸段和直腸段INR中的超微結構基本相似。在INR神經節(jié)中分布有大量的神經元，這些神經元的輪廓呈不規(guī)則狀，每個神經元有一個核，核表面光滑或有不同程度的溝壑，核中染色質稀少。神經元胞質中有各種細胞器的存在，部分神經元胞質中有大量平行層

3、疊排列的粗面內質網。在胞質中有中空狀的分泌顆粒。神經節(jié)中的衛(wèi)星細胞分布在神經元細胞的周圍，比神經元小，核形狀不規(guī)則，占據細胞的最大面積，其中的染色質多且邊緣染色質濃密。神經元和衛(wèi)星細胞外包基底膜。在神經節(jié)中，有許多連續(xù)型的毛細血管和少量的漿細胞。神經節(jié)中的突觸可根據其基本結構分為Gray Ⅰ型突觸和GrayⅡ型突觸。而軸突曲張體和神經末梢根據其中含有不同的突觸囊泡可分為三種，一種是含有大量小清亮突觸囊泡(SSV)和極少數含致密核芯顆粒的

4、大顆粒囊泡(LGV)；第二種是其中含有SSV和LGV，二者的數量相當；第三種是其中含有大量的線粒體和或多或少的突觸囊泡。在INR的節(jié)間束中有大量的無髓神經纖維和少數有髓神經纖維存在，在有髓神經纖維外周，施旺氏細胞形成的髓鞘清晰可見。從橫斷面觀察，可見一個施旺氏細胞在形成一根有髓神經纖維髓鞘的同時還包裹了多根無髓神經纖維。這些超微結構說明雞INR具有許多特殊性，可能與其復雜的調節(jié)功能有關。 試驗Ⅱ.膽堿乙酰轉移酶和多巴胺羥化酶在雞

5、INR中的分布堿乙酰轉移酶(ChAT)和多巴胺羥化酶(D β H)分別是乙酰膽堿和去甲腎上腺素的標志酶。本試驗以ChAT作為副交感節(jié)后神經元的標志酶，D β H作為交感節(jié)后神經元的標志酶，應用SABC法免疫組織化學技術，研究ChAT和D β H在雞INR內的分布，以確定交感和副交感節(jié)后神經元在INR中的分布，并確定各自所占的比例。研究發(fā)現，INR內ChAT陽性神經元占總神經元數量的51.74±9.00％，D β H陽性神經元占36.21

6、±8.81％。兩種神經元胞體或為多突起的多邊形，或為一端有長突起的橢圓形，它們分布于神經節(jié)內的神經纖維之間。D β H神經元在節(jié)間束也有個別分布。部分神經纖維也呈ChAT或D β H陽性。這表明雞INR內既有副交感節(jié)后神經元，又含有交感節(jié)后神經元，且各自的成份分別約為52％和36％。 試驗Ⅲ.雞血管活性腸肽RNA探針的制備及其mRNA在雞INR中的分布本試驗應用RT-PCR方法從雞腦中擴增血管活性腸肽(VIP)的基因片段，將其連

7、接于pGM-T Easy。分別利用pGM-T Easy中T7和SP6的RNA聚合酶的啟動子及RNA聚合酶，以線性化的VIP/pGM-T Easy為模板在體外轉錄合成正、反義DIG標記RNA探針。通過原位雜交方法將合成的探針用于探查VIPmRNA在雞INR中的分布情況。結果表明，INR中大部分神經細胞中有VIPmRNA的轉錄，其中VIP探針雜交陽性細胞在空回腸段和直腸段INR分別占74.71±12.02％和86.60±9.63％。原位雜交

8、陽性神經細胞胞體呈梭形或橢圓形，其縱軸與INR延伸的方向平行；陽性神經元胞體在INR神經節(jié)中呈層狀或成群分布。在節(jié)間束也有少量的陽性細胞分布。本文從基因水平證明INR中有大量VIP神經元，并可能作為外源性VIP能神經纖維支配到腸壁和輸卵管等其它腹腔器官。 試驗Ⅳ.雞生長抑素前體蛋白1RNA探針的制備及其mRNA在雞INR中的分布本試驗應用體外轉錄的方法合成正、反義地高辛標記生長抑素前體蛋白1(PSS1)的RNA探針。通過原位雜交

9、方法將合成的探針用于探查PSS1 mRNA在雞空回腸段和直腸段INR中的分布情況。結果表明，INR中大部分神經細胞中有PSS1的mRNA轉錄，其中PSS1探針雜交陽性細胞在空回腸段和直腸段INR分別占86.98±7.93％和86.07±6.11％。原位雜交陽性神經細胞胞體呈有突起的梭形或橢圓形，其縱軸與INR延伸的方向平行；陽性神經細胞胞體在INR神經節(jié)中呈層狀或成群分布。在節(jié)間束也有少量的陽性細胞分布。本文從基因水平證明INR中大量神

10、經細胞進行PSS1的mRNA的轉錄，并可能作為外源性生長抑素1能神經纖維支配到腸壁和輸卵管等其它腹腔器官。 試驗Ⅴ.雞前腦啡肽原RNA探針的制備及其mRNA在雞INR中的分布本試驗同樣應用體外轉錄的方法合成正、反義地高辛標記前腦啡肽原(PPE)的RNA探針。通過原位雜交方法將合成的探針用于探查PPE mRNA在雞空回腸段和直腸段INR中的分布情況。 結果表明，INR中大部分神經細胞中有PPE的mRNA轉錄，其中PPE探針

11、雜交陽性細胞在空回腸段和直腸段INR分別占83.79±7.96％和96.04±4.53％。原位雜交陽性神經細胞胞體呈有突起的梭形或橢圓形，其縱軸與INR延伸的方向平行；陽性神經細胞胞體在INR神經節(jié)中呈層狀或成群分布。在節(jié)間束也有少量的陽性細胞分布。本文從基因水平證明INR中大量神經細胞進行PPE的mRNA轉錄，并可能作為外源性腦啡肽能神經纖維支配到腸壁和輸卵管等其它腹腔器官。結合試驗Ⅳ和Ⅴ的研究結果，在整個INR中都可能有VIP、PP