P2X-,2-3-受體在結(jié)狀神經(jīng)節(jié)細胞介導心肌缺血損傷信息傳遞的作用研究.pdf

1、研究背景和目的： 冠心病心肌梗死是臨床常見的疾病之一，致死率較高。心肌缺血時產(chǎn)生多種化學物質(zhì)，其中包括ATP作用于心臟傳入神經(jīng)引起心肌痛，并加重冠心病心梗的發(fā)病。我們實驗室前期的研究顯示心臟傳入神經(jīng)通路中的頸上、星狀交感神經(jīng)節(jié)細胞的P2X3受體參與了心肌缺血損傷信息傳遞。結(jié)狀神經(jīng)節(jié)緊貼頸上交感神經(jīng)節(jié)，并以纖維網(wǎng)與之相連。同時，我們實驗室前期的形態(tài)學實驗顯示結(jié)狀神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元P2X2/3受體涉及心肌缺血引起的心肌傷害性反應(yīng)的信息傳遞

2、，然而其電生理機制尚不清楚。本實驗擬通過觀察心肌缺血模型大鼠結(jié)狀神經(jīng)節(jié)（Nodose ganglion，NG）神經(jīng)元P2X受體激動劑激活電流，P2X2/3受體特異性拮抗劑對P2X受體激動劑激活電流的作用以及心肌缺血后P2X2/3受體表達的變化，探討P2X2/3受體在結(jié)狀神經(jīng)節(jié)（NG）神經(jīng)元介導心肌缺血損傷信息傳遞及心肌缺血損傷引發(fā)的自主反射中的作用，為冠心病心肌缺血、心肌梗死的防治提供實驗依據(jù)。 實驗方法： 1.大鼠生理

3、鹽水對照組和心肌缺血模型組的建立。 2.在對照組和心肌缺血模型組大鼠新鮮分離的結(jié)狀神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元上，應(yīng)用全細胞膜片鉗技術(shù)，觀察P2X受體激動劑激活電流及P2X2/3受體特異性拮抗劑對激動劑激活電流的影響。 3.分別取對照組和心肌缺血模型組大鼠結(jié)狀神經(jīng)節(jié)組織標本冰凍切片，觀察免疫組織熒光雙標染色后P2X2/3（P2X3和P2X2）受體的表達情況。 結(jié)果： 1.對照組心電圖未出現(xiàn)明顯變化，心肌缺血模型組大鼠心電

4、圖均出現(xiàn)深大Q波或ST段位移，表明制模成功。 2.對照組（85.7％，42/49）和心肌缺血組（92.9％，52/56）大多數(shù)受檢NG神經(jīng)元對外加ATP（1-1000μmol/L）有反應(yīng)，引起劑量依賴性的內(nèi)向電流，此電流呈現(xiàn)快失敏、慢失敏和混合型三種形式，其中混合型占大多數(shù)。該電流可被P2X3受體激動劑α，β-meATP所模擬，也可以被P2X2/3受體特異性拮抗劑A-317491所抑制，提示該電流為激活P2X2/3受體所產(chǎn)生。同

5、一濃度的ATP、α，β-meATP產(chǎn)生的激活電流，心肌缺血組明顯高于對照組，且隨著濃度的增加這種激活電流的增大更明顯。同一濃度的P2X2/3受體特異性拮抗劑A-317491對ATP（100μmol/L）-激活電流的抑制作用，心肌缺血組也明顯高于對照組，且隨著A-317491濃度的增加這種這種抑制作用更明顯。I-V曲線顯示：心肌缺血組和對照組的逆轉(zhuǎn)電位均在0 mV左右。說明心肌缺血后，ATP激活電流的增加不是通過改變配體門控通道的離子通透