頸部交感神經(jīng)節(jié)P2X7受體與心肌缺血損傷介導(dǎo)失穩(wěn)態(tài)交感反射的研究.pdf

1、研究背景和目的：冠心病是臨床常見疾病。三磷酸腺苷(ATP)作用于嘌呤能受體參與信息傳遞。實(shí)驗(yàn)室前期實(shí)驗(yàn)表明心肌缺血損傷引起頸上、星狀交感神經(jīng)節(jié)嘌呤受體(P2X2，P2X3，P2X2/3)表達(dá)升高，交感節(jié)后神經(jīng)元活性增強(qiáng)，致血壓升高、心率加快等交感興奮性反射活動(dòng)。P2X7受體與多種功能與疾病有關(guān)，但頸部交感神經(jīng)節(jié)P2X7受體與心肌缺血損傷的關(guān)系尚未探明。本研究觀察P2X7受體在心肌缺血引發(fā)的交感興奮反射信息傳遞中的作用，為冠心病的防治提供

2、新的治療靶點(diǎn)。
　　 方法：應(yīng)用心肌缺血大鼠模型進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)大鼠隨機(jī)分為：生理鹽水對(duì)照組、結(jié)扎冠狀動(dòng)脈心肌缺血模型組、假手術(shù)組和結(jié)扎冠狀動(dòng)脈P2X7受體拮抗劑(oxATP)干預(yù)組。實(shí)驗(yàn)內(nèi)容：(1)結(jié)扎大鼠左冠狀動(dòng)脈前降支建立大鼠心肌缺血?jiǎng)游锬Ｐ停ㄟ^心電圖、心肌HE染色觀察心肌缺血模型大鼠心功能和心肌形態(tài)的變化確定建模效果；(2)使用無(wú)創(chuàng)法血壓計(jì)測(cè)量大鼠的血壓和心率，觀察心肌缺血大鼠血壓、心率的變化，并與生理鹽水對(duì)照組、假手術(shù)

3、組和結(jié)扎冠狀動(dòng)脈P2X7受體拮抗劑干預(yù)組比較；(3)檢測(cè)生理鹽水對(duì)照組、心肌缺血模型組、假手術(shù)組、結(jié)扎冠狀動(dòng)脈P2X7受體拮抗劑干預(yù)組大鼠血清肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脫氫酶(LDH)和心肌肌鈣蛋白I(cTn-I)四種心臟標(biāo)志物的含量；(4)免疫熒光雙標(biāo)法觀察生理鹽水對(duì)照組、心肌缺血模型組、假手術(shù)組和結(jié)扎冠狀動(dòng)脈P2X7受體拮抗劑干預(yù)組頸上、星狀交感神經(jīng)節(jié)細(xì)胞和心肌交感神經(jīng)的P2X7受體和酪氨酸羥化酶(TH)抗

4、體的共表達(dá)情況。(5)免疫組織化學(xué)法和蛋白印跡(Western Blot)觀察生理鹽水對(duì)照組、心肌缺血模型組、假手術(shù)組和結(jié)扎冠狀動(dòng)脈P2X7受體拮抗劑干預(yù)組頸上、星狀交感神經(jīng)節(jié)和心肌的P2X7受體的表達(dá)情況。以及用Western Blot觀察各組細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)蛋白激酶(ERK1/2)和磷酸化ERK1/2的蛋白表達(dá)情況。(6)原位核酸分子雜交試驗(yàn)觀察生理鹽水對(duì)照組、心肌缺血模型組、假手術(shù)組和結(jié)扎冠狀動(dòng)脈P2X7受體拮抗劑干預(yù)組頸上、星狀交

5、感神經(jīng)節(jié)的P2X7受體mRNA表達(dá)的變化。(7)ELISA法檢測(cè)各組大鼠血清中白細(xì)胞介素-6(IL-6)、腫瘤壞死因子(TNF-α)的變化
　　 結(jié)果：(1)大鼠心臟左冠狀動(dòng)脈前降支結(jié)扎后，心電圖即顯示ST段呈弓背抬高，心肌缺血模型組分別于7天和30天后，觀察心電圖出現(xiàn)深大的病理性Q波，HE染色可見心肌萎縮、心肌纖維化、出血灶或壞死病灶，大體可見大面積結(jié)締組織增生現(xiàn)象和代償性心肌肥大。結(jié)扎冠狀動(dòng)脈P2X7受體拮抗劑干預(yù)組大鼠心電

6、圖的異常變化和心肌損傷得到改善。(2)心肌缺血模型組大鼠收縮壓、舒張壓、心率與生理鹽水對(duì)照組、假手術(shù)組和結(jié)扎冠狀動(dòng)脈P2X7受體拮抗劑干預(yù)組相比均增加(n=5)(p<0.05)。結(jié)扎冠狀動(dòng)脈P2X7受體拮抗劑干預(yù)組大鼠收縮壓、舒張壓、心率與生理鹽水對(duì)照組、假手術(shù)組間無(wú)明顯差異(n=5)(p>0.05)。(3)心肌缺血模型組的CK-MB、CK、LDH和cTn-I濃度與生理鹽水對(duì)照組、假手術(shù)組和結(jié)扎冠狀動(dòng)脈P2X7受體拮抗劑干預(yù)組相比顯著增

7、加(n=5)(p<0.05)。(4)免疫熒光雙標(biāo)法結(jié)果顯示大鼠頸上、星狀交感神經(jīng)節(jié)細(xì)胞和心肌交感神經(jīng)P2X7受體和酪氨酸羥化酶(TH)抗體的共表達(dá)情況，心肌缺血模型組P2X7受體和TH受體表達(dá)明顯高于生理鹽水對(duì)照組、假手術(shù)組和結(jié)扎冠狀動(dòng)脈P2X7受體拮抗劑干預(yù)組。(5)免疫組織化學(xué)染色結(jié)果顯示心肌缺血模型組大鼠頸上、星狀交感神經(jīng)節(jié)細(xì)胞P2X7受體表達(dá)高于生理鹽水對(duì)照組、假手術(shù)組和結(jié)扎冠狀動(dòng)脈P2X7受體拮抗劑干預(yù)組(n=10)(p<0.

8、05)。結(jié)扎冠狀動(dòng)脈P2X7受體拮抗劑干預(yù)組、假手術(shù)組與生理鹽水對(duì)照組之間無(wú)明顯差異(n=10)(p>0.05)。(6)Western blotting結(jié)果顯示在β-actin標(biāo)化后心肌缺血模型組大鼠頸上、星狀交感神經(jīng)節(jié)和心肌P2X7受體蛋白表達(dá)顯著高于生理鹽水對(duì)照組、假手術(shù)組和結(jié)扎冠狀動(dòng)脈P2X7受體拮抗劑干預(yù)組(n=10)(p<0.05)。結(jié)扎冠狀動(dòng)脈P2X7受體拮抗劑干預(yù)組、假手術(shù)組與生理鹽水對(duì)照組之間無(wú)明顯差異(n=10)(p>

9、0.05)。心肌缺血模型組大鼠頸上、星狀交感神經(jīng)節(jié)磷酸化ERK1/2的蛋白表達(dá)顯著高于生理鹽水對(duì)照組、假手術(shù)組和結(jié)扎冠狀動(dòng)脈P2X7受體拮抗劑干預(yù)組(n=10)(p<0.05)。結(jié)扎冠狀動(dòng)脈P2X7受體拮抗劑干預(yù)組、假手術(shù)組與生理鹽水對(duì)照組之間無(wú)明顯差異(n=10)(p>0.05)。各組之間ERK1/2的總蛋白表達(dá)無(wú)明顯差異(n=10)(p<0.05)。(7)原位核酸分子雜交試驗(yàn)結(jié)果顯示心肌缺血模型組大鼠頸上、星狀交感神經(jīng)節(jié)P2X7受體

10、mRNA的表達(dá)高于生理鹽水對(duì)照組、假手術(shù)組和結(jié)扎冠狀動(dòng)脈P2X7受體拮抗劑干預(yù)組(n=10)(p<0.05)。結(jié)扎冠狀動(dòng)脈P2X7受體拮抗劑干預(yù)組、假手術(shù)組與生理鹽水對(duì)照組之間無(wú)明顯差異(n=10)(p>0.05)。(8)ELISA試劑盒檢測(cè)7天和30天各組大鼠血清白細(xì)胞介素-6(IL-6)、腫瘤壞死因子(TNF-α)濃度結(jié)果顯示，心肌缺血組血清中白細(xì)胞介素-6(IL-6)、腫瘤壞死因子(TNF-α)含量明顯高于生理鹽水對(duì)照組、假手術(shù)組

11、和結(jié)扎冠狀動(dòng)脈P2X7受體拮抗劑干預(yù)組(p<0.05)；生理鹽水對(duì)照組、假手術(shù)組和結(jié)扎冠狀動(dòng)脈P2X7受體拮抗劑干預(yù)組之間無(wú)明顯差異(p>0.05)。
　　 結(jié)論：心肌缺血大鼠頸上、星狀交感神經(jīng)節(jié)和心肌交感神經(jīng)P2X7受體表達(dá)升高，P2X7受體拮抗劑干預(yù)后抑制心肌缺血大鼠頸上、星狀交感神經(jīng)節(jié)及心肌交感神經(jīng)P2X7受體激活，進(jìn)而阻斷頸部交感神經(jīng)興奮信息傳遞，使心肌缺血損傷大鼠增高的血壓降低、加快的心率減慢。因此，大鼠頸上、星狀交感