NSC移植對(duì)頸上交感神經(jīng)節(jié)損毀兔MAP-2、GFAP表達(dá)的影響.pdf

1、目的：
　　建立兔頸上交感神經(jīng)節(jié)（superior cervical sympathetic ganglion,SCSG）損毀模型，用誘導(dǎo)分化的骨髓源神經(jīng)干細(xì)胞(Neuron stem cells,NSC)對(duì)其移植，觀察兔瞳孔恢復(fù)情況，檢測(cè)受損SCSG內(nèi)微管相關(guān)蛋白2（microtubule associated protein2,MAP2）及膠質(zhì)纖維酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein,GFA

2、P）的變化，探討神經(jīng)干細(xì)胞對(duì)神經(jīng)損傷的修復(fù)作用及可能途徑。
　　方法：
　　取新生1周新西蘭白兔股骨骨髓，經(jīng)全骨髓密度梯度離心聯(lián)合貼壁培養(yǎng)法得到兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（bone marrow derived stroma cells,BMSCs），用堿性成纖維生長(zhǎng)因子（basic fibroblast growth factor,bFGF）和睫狀神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(ciliary neurotrophic factor,CNTF）定向

3、誘導(dǎo)為神經(jīng)干細(xì)胞，并分別鑒定BMSCs及神經(jīng)干細(xì)胞的表型特征。
　　用直持針鉗壓榨兔SCSG、每次壓榨10s，制備兔SCSG損毀模型（24只），造模成功后隨機(jī)分為三組（每組8只）：模型對(duì)照組（B組），培養(yǎng)液對(duì)照組（C組），神經(jīng)干細(xì)胞干預(yù)組（D組）。A組為正常組（8只），不進(jìn)行造模。
　　SCSG損毀模型成功后第7天，B組用注射器經(jīng)耳緣靜脈緩慢注射1ml生理鹽水，C組注射1ml神經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng)液，D組注射1ml含2×106個(gè)神經(jīng)

4、干細(xì)胞的神經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng)液。分別于移植后第1天、第7天、第10天、第14天、第21天觀察記錄四組兔損傷側(cè)瞳孔直徑變化；移植第21天后處死兔，取損毀側(cè)兔SCSG，免疫組化檢測(cè)其MAP-2、GFAP的變化情況。
　　結(jié)果：
　　1：兔SCSG損毀后，損毀側(cè)表現(xiàn)出Horner綜合征：瞳孔縮小，瞼裂變小，眼球凹陷；造模后28天Horner綜合征表現(xiàn)仍較突出。
　　2：分離培養(yǎng)的兔BMSCs，免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)結(jié)果提示CD44、CD

5、54呈陽(yáng)性表達(dá)，CD34呈陰性表達(dá)，符合BMSCs的表型特征；誘導(dǎo)后的神經(jīng)干細(xì)胞，NSE、Nestin免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)結(jié)果均呈陽(yáng)性表達(dá)，符合神經(jīng)干細(xì)胞的表型特征。
　　3：瞳孔直徑測(cè)量(mm)，移植后第1、7、10、14、21，A組右側(cè)瞳孔分別為：7.92+0.38,8.02+0.30,8.13+0.37,7.96+0.36,8.12+0.25；B組：5.82+0.42,5.84+0.34,5.68+0.29,5.91+0.31,

6、5.80+0.36；C組：5.85+0.32,5.75+0.32,5.64+0.37,5.84+0.27,5.59+0.23；D組：5.64+0.33,5.72+0.35，6.79+0.33,7.98+0.28,8.06+0.21；B組與C組各時(shí)間點(diǎn)比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），但均低于A組， D組與A組比較，在第1、7、10天差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，在第14、21天無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，D組分別與B組、C組比較，在第1、7天差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義

7、，在第10、14、21天差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；各組內(nèi)的比較：A、B、C組各時(shí)間點(diǎn)比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；D組組內(nèi)第7天與第1天差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；第10天與第1、7天比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；第14天與第1、7、10天比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；第21天與第1、7、10天比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），與第14天比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。
　　4：病理組織觀察結(jié)

8、果：
　?。?）HE染色：B組與C組SCSG內(nèi)，神經(jīng)元細(xì)胞稀少，細(xì)胞排列不均勻，細(xì)胞形態(tài)、大小各異，細(xì)胞間質(zhì)增生較多，血管形成較少，細(xì)胞核出現(xiàn)固縮,并可見(jiàn)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)；A、D組兔SCSG內(nèi)，細(xì)胞生長(zhǎng)更緊密、排列更整齊，細(xì)胞形態(tài)及大小大體一致，有少量細(xì)胞間質(zhì)增生，血管形成更豐富，細(xì)胞核無(wú)固縮現(xiàn)象。
　?。?）MAP-2：B組與C組神經(jīng)節(jié)MAP-2呈陰性表達(dá)，A組與D組MAP-2呈陽(yáng)性表達(dá)，光密度測(cè)量：A組0.787+0.245

9、，B組0.457+0.022，C組0.447+0.020，D組0.771+0.027；B組與C組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），A組D組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）， A、D組分別與B組、C組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　?。?）GFAP：B組與C組GFAP呈陽(yáng)性表達(dá)，A組與D組GFAP呈陰性表達(dá)，光密度值測(cè)量：A組0.249+0.020，B組0.640+0.038，C組0.658+0.031，D組0.2

10、71+0.022；B組與C組比較差異不明顯，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），A組與D組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），而A組與D組明顯低于B組與C組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　結(jié)論：
　　1、兔SCSG損毀后體內(nèi)神經(jīng)元的標(biāo)志蛋白MAP-2下降、膠質(zhì)細(xì)胞的標(biāo)志蛋白GFAP增加。
　　2、神經(jīng)干細(xì)胞移植對(duì)受損的兔SCSG神經(jīng)功能有修復(fù)作用，其作用途徑可能是通過(guò)抑制GFAP的表達(dá)、促進(jìn)MAP-2的表達(dá)來(lái)實(shí)