P2X-,3-受體在大鼠不同發(fā)育階段疼痛中的作用研究.pdf

1、疼痛的研究目前成為臨床的熱點,針對疼痛的發(fā)生、傳導等機制的研究可以為臨床治療提供新的思路。疼痛發(fā)生、傳導過程涉及到眾多的神經(jīng)纖維、神經(jīng)元及膠質細胞等,通過不同的受體及通道傳遞疼痛的信號。P2X3受體選擇性的分布在傷害性感受器細胞,在疼痛的發(fā)生、傳導中發(fā)揮重要作用。通過P2X3受體的激動劑、特異性的抑制劑和RNAi技術抑制P2X3受體表達的研究發(fā)現(xiàn),P2X3受體在不同的疼痛模型,如炎性痛和神經(jīng)病理性痛等不同類型的疼痛中發(fā)揮重要作用。但是這

2、些實驗均以成年動物為模型,很少涉及到幼年動物模型,而兒童的疼痛也比較常見,且神經(jīng)系統(tǒng)在發(fā)育過程中可塑性較強,發(fā)育過程中的刺激可能會引起神經(jīng)系統(tǒng)結構和功能改變,因此本實驗采用大鼠生后發(fā)育過程中的角叉菜膠致炎性痛和坐骨神經(jīng)慢性壓迫性損傷(Chronic constriction injury,CCI)術后神經(jīng)病理性痛模型研究P2X3受體在疼痛中的作用。
　　 方法:
　　 1.通過大鼠足底皮下注射角叉菜膠致炎建立急性炎性痛模

3、型:通過大鼠坐骨神經(jīng)CCI術建立神經(jīng)病理性痛模型。
　　 2.通過觀察模型大鼠的行為學變化,并測定動物的熱痛閾(Thermal withdrawllatency,TWL)和機械性痛閾(Paw withdrawl threshold,PWT)研究疼痛的發(fā)生、發(fā)展過程。
　　 3.通過免疫組織化學技術動態(tài)監(jiān)測炎性痛和神經(jīng)病理性痛模型大鼠的背根神經(jīng)節(jié)(Dorsal root ganglion,DRG)和脊髓背角的P2X3受體的

4、表達變化特點,并進行半定量分析。
　　 結果:
　　 第一部分:
　　 1.成功建立了大鼠不同發(fā)育階段角叉菜膠致炎性痛模型,足底皮下注射角叉菜膠后出現(xiàn)舔足、縮足等痛覺相關行為。
　　 2.發(fā)育過程中正常大鼠的痛閾逐漸升高。新生大鼠與成年大鼠足底皮下注射交叉菜膠后的痛閾變化趨勢相似,均出現(xiàn)熱痛敏和機械性痛敏現(xiàn)象,痛閾先降低,注射后6-12h達最低點,再逐漸恢復,注射后7d大多數(shù)恢復至正常水平。
　　

5、 3.大鼠正常發(fā)育過程DRG中P2X3受體表達逐漸下調。新生7天、14天和21天的幼年大鼠足底皮下注射角叉菜膠后,P2XB受體在DRG中的表達下調,而且下降速度快于正常發(fā)育過程中的下降速度。成年大鼠足底皮下注射角叉菜膠致炎后DRG中P2Xs受體表達逐漸升高,注射后1d達到最高,而后逐漸下降,注射后7d接近正常水平。新生7天的大鼠脊髓背角P2X3受體在炎性痛過程中變化不明顯;而成年大鼠足底皮下注射角叉菜膠致炎后脊髓背角中P2Xs受體表達逐

6、漸升高,注射后1d達到最高,而后逐漸下降,注射后7d接近正常水平。
　　 第二部分:
　　 1.成功建立了大鼠不同發(fā)育階段坐骨神經(jīng)CCI術后致神經(jīng)病理性痛的模型,動物出現(xiàn)典型的神經(jīng)病理性痛覺相關行為。
　　 2.發(fā)育過程中正常大鼠的痛閾逐漸升高。新生大鼠與成年大鼠CCI術后的痛閾變化趨勢相似,均出現(xiàn)痛敏現(xiàn)象,熱痛閾和機械性痛閾先降低,術后14d達到最低,再逐漸恢復,至術后28d接近正常水平。
　　 3.大

7、鼠正常發(fā)育過程中DRG中P2X3受體表達逐漸下調。新生7天、14天和21天組的大鼠坐骨神經(jīng)CCI術后能引起術側的P2X3受體在DRG中的表達下調,且速度快于正常發(fā)育過程中的下降速度。成年組大鼠坐骨神經(jīng)CCI后大鼠DRG中P2X3受體表達逐漸升高,術后14d達到最高,而后逐漸下降,術后28d接近正常水平。新生7天的大鼠脊髓背角P2Xs受體表達變化不明顯;而成年組大鼠坐骨神經(jīng)CCI后大鼠脊髓背角中P2X3受體表達逐漸升高,術后14d達到最高

8、,而后逐漸下降,術后28d接近正常水平。
　　 結論:
　　 1.新生大鼠的神經(jīng)系統(tǒng)生后正常發(fā)育成熟過程中痛閾逐漸升高。皮下注射角叉菜膠后能引起新生和成年大鼠的急性炎性痛,動物均出現(xiàn)痛閾迅速下降再逐漸恢復至正常的趨勢;坐骨神經(jīng)CCI術后能引起新生和成年大鼠的神經(jīng)病理性痛,動物均出現(xiàn)痛閾下降再緩慢恢復至正常的趨勢。與神經(jīng)病理性痛相比較,炎性痛發(fā)病快,持續(xù)時間短,恢復快。
　　 2.P2X3受體在大鼠生后神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)

9、育成熟中發(fā)揮重要作用,而且新生大鼠的神經(jīng)系統(tǒng)具有易損性,新生大鼠受到炎性痛和神經(jīng)病理性痛刺激后,DRG中P2X3受體表達下降。
　　 4.P2X3受體在成年大鼠的炎性痛和神經(jīng)病理性痛過程中發(fā)揮重要作用,成年大鼠受到炎性痛和神經(jīng)病理性痛刺激后,DRG和脊髓背角P2X3受體的表達增加。
　　 綜上所述,P2X3受體在神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育成熟中發(fā)揮作用,并且在炎性痛和神經(jīng)病理性痛過程中發(fā)揮重要作用。但是疼痛涉及的細胞、受體及通道比較