利用RNA干擾技術(shù)抑制P2X-,3-受體基因表達(dá)治療骨癌痛的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、中國(guó)人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院;中國(guó)人民解放軍總醫(yī)院博士學(xué)位論文利用RNA干擾技術(shù)抑制P2X受體基因表達(dá)治療骨癌痛的實(shí)驗(yàn)研究姓名：姜雨鴿申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：麻醉學(xué)指導(dǎo)教師：張宏20080528軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院博士學(xué)位論文化：接種腫瘤細(xì)胞后2 1 d ，取骨癌痛組和對(duì)照組大鼠L 4 ．6 D R G ，R T - P C R 方法檢測(cè)P 2 X 3 受體m R N A 轉(zhuǎn)錄水平的變化，免疫印跡法檢測(cè)P 2 X 3 受體蛋白表達(dá)的變化。重復(fù)實(shí)驗(yàn)

2、的電泳圖譜即免疫印跡結(jié)果用熒光掃描分析儀分析，相對(duì)表達(dá)量根據(jù)各電泳區(qū)帶的輝度和內(nèi)參照1 3 - a c t i n 的輝度之比來(lái)計(jì)算。③骨癌痛大鼠D R G 中P 2 X 3 受體誘發(fā)電流的變化：接種腫瘤細(xì)胞后2 1 d ，取骨癌痛組和對(duì)照組大鼠L 4 _ 6 D R G ，急性分散，全細(xì)胞膜片鉗記錄方法比較噴射給予a ，p - m e A T P3 1 a M 后P 2 X 3 受體誘發(fā)電流的變化。 結(jié)果：①接種腫瘤細(xì)胞1 0 d 后

3、，骨癌痛組大鼠觸左側(cè)誘發(fā)痛閾值和C 0 2 激光痛閾值開始降低( P < 0 ．0 5 ) ，此后疼痛癥狀進(jìn)行性加重。接種1 4 d ，2 1 d 骨癌痛組大鼠左側(cè)的觸誘發(fā)痛閾值和C 0 2 激光痛閾值較右側(cè)明顯降低( P < 0 ．0 1 ) ；與同一時(shí)間點(diǎn)對(duì)照組左側(cè)的觸誘發(fā)痛閾值和C 0 2 激光痛閾值相比顯著降低( P < 0 ．0 1 ) 。觀察期間對(duì)照組大鼠和骨癌痛組大鼠右側(cè)觸誘發(fā)痛閾值及C 0 2激光熱痛敏

4、閾值均沒(méi)有明顯變化。大鼠接種細(xì)胞后2 1 d 行脛骨病理切片可見腫瘤組織在骨髓腔內(nèi)浸潤(rùn)性生長(zhǎng)，破壞骨質(zhì)。②接種腫瘤細(xì)胞2 1d 骨癌痛組大鼠D R G 中P 2 X 3 m R N A 轉(zhuǎn)錄水平及蛋白表達(dá)較對(duì)照組均明顯增強(qiáng)( P < 0 ．0 1 ) 。③骨癌痛組大鼠P 2 X 3 受體誘發(fā)電流峰值為1 ．4 + 0 ．2 3n A ( n = 5 ) ，對(duì)照組大鼠為O ．8 + 0 ．1 2n A ( n = 5 ) ， 二者相

5、比有顯著性差異( P < 0 ．0 1 ) 。結(jié)論：脛骨內(nèi)接種W a l k e r 2 5 6 細(xì)胞可以成功制備骨癌性疼痛動(dòng)物模型，用于癌癥性疼痛的機(jī)制及治療研究；大鼠骨癌痛模型中P 2 X 3 受體轉(zhuǎn)錄水平及蛋白表達(dá)均上調(diào)，P 2 X 3 受體電流增強(qiáng)，通道數(shù)目增加，提示該通道參與了骨癌痛的發(fā)生過(guò)程。關(guān)鍵詞：骨癌痛；P 2 X 3 受體；背根神經(jīng)節(jié)第二部分抑制P 2 X 3 受體基因表達(dá)的慢病毒s h R N A 的構(gòu)建目的：