2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題（含答案詳解+作文范文）_第1頁
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1、 本文通過構(gòu)建帶有綠色熒光蛋白報告基因的哺乳動物shRNA表達載體和HBeAg真核表達載體，兩者共轉(zhuǎn)染Hela細胞，探討shRNA表達載體對HBeAg表達的抑制作用，為應(yīng)用RNAi技術(shù)治療乙型肝炎奠定一定的理論基礎(chǔ)。方法：本研究首先采用PCR方法從含有人U6啟動子的載體PTZU6+1中擴增U6啟動子，將其克隆到pEGFP-C1載體中，通過限制性內(nèi)切酶、PCR及測序?qū)?gòu)建的載體進行鑒定，并轉(zhuǎn)染Hela細胞，觀察綠色熒光蛋白的表達；然

2、后構(gòu)建HBeAg表達載體，通過酶切、PCR及測序鑒定，把質(zhì)粒轉(zhuǎn)染Hela細胞，用RT-PCR檢測mRNA的轉(zhuǎn)錄，免疫細胞化學(xué)檢測HBeAg前體的表達，ELISA和MEIA分別檢測細胞裂解液HBeAg前體和培養(yǎng)上清HBeAg的表達；把構(gòu)建的兩載體按7：1的比例共轉(zhuǎn)染Hela細胞，用半定量PCR和MEIA分析shRNA表達載體對HBeAgmRMA和蛋白質(zhì)的抑制情況；研究表明：成功構(gòu)建了帶有綠色熒光蛋白報告基因的哺乳動物shRNA表達載體和乙

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