RNA干擾抑制肺鱗狀細胞癌NCI-H520細胞CAR基因表達的體外實驗研究.pdf

1、目的：建立RNA干擾(RNAinterference，RNAi)抑制柯薩奇病毒腺病毒受體(coxsackievirusandadenovirusreceptor，CAR)基因表達的肺癌NCI-H520穩(wěn)定表達細胞系，通過平板克降形成實驗、transwell侵襲及遷移實驗初步探討CAR失表達對人肺鱗狀細胞癌NCI-H520細胞增殖與侵襲遷移的影響。
　　方法：
　　1將針對CARmRNA序列設計的三個小干擾RNA重組質粒分別以

2、脂質體轉染至人肺鱗狀細胞癌NCI-H520細胞，并經(jīng)G418抗性篩選得到穩(wěn)定細胞系。
　　2采用半定量RT-PCR和Westernblot檢測3個穩(wěn)定表達細胞系和陰性對照、空白對照組細胞中CARmRNA和蛋白質的表達情況，判斷抑制效果并篩選出抑制效果最佳的一組穩(wěn)定表達細胞系。
　　3用平板克隆形成實驗和transwell侵襲及遷移實驗觀察RNA干擾抑制CAR基因表達對NCI-H520肺癌細胞增殖與侵襲遷移的影響。
　　

3、結果：
　　1篩選得到三組抑制CAR基因表達的NCI-H520穩(wěn)定細胞系。
　　2半定量RT-PCR和Westernblot結果顯示，三組穩(wěn)定細胞系中CARmRNA和蛋白質表達均有不同程度的下降。其中shRNA-2抑制作用最強，其對CARmRNA和蛋白質表達的抑制率分別達到82.5％和79.8％。
　　3平板克隆形成實驗顯示，shRNA-2抑制CAR基因表達后NCI-H520細胞的增殖能力有所下降，但是其差異無統(tǒng)計學意

4、義(P>0.05)，transwell侵襲及遷移實驗顯示NCI-H520細胞侵襲遷移能力明顯下降，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
　　結論：
　　1篩選出了抑制CAR基因表達效果最佳的一組shRNA，并建立了能穩(wěn)定而有效抑制CAR基因表達的肺鱗狀細胞癌NCI-H520細胞系。
　　2抑制CAR基因表達后，NCI-H520細胞侵襲及遷移能力顯著受到了抑制，初步證實了CAR在肺癌細胞侵襲遷移過程中的重要作用。