不同發(fā)育階段小鼠睪丸引帶的組織形態(tài)學(xué)研究.pdf

1、目的：
　　睪丸引帶（gubernaculumtestis）是連接于睪丸下極、附睪尾到陰囊或恥骨等處的組織結(jié)構(gòu)。在胚胎期，睪丸引帶經(jīng)歷了一系列明顯的形態(tài)和結(jié)構(gòu)變化，這些變化與胚胎期睪丸的發(fā)育和下降密切相關(guān)。胚胎期睪丸的發(fā)育和下降又直接影響整個(gè)雄性生殖系統(tǒng)的發(fā)育，并可能影響到成年期生殖系統(tǒng)的功能。近來(lái)許多研究表明，人類精子數(shù)和精液量在明顯下降，男性生殖系統(tǒng)分化和發(fā)育異常明顯增加，它們大都與胚胎期睪丸的發(fā)育和下降不全相關(guān)。因此胚胎期睪

2、丸發(fā)育和下降機(jī)理的研究近年來(lái)備受關(guān)注。其中，在睪丸引帶研究方面也有不少進(jìn)展。然而，長(zhǎng)期以來(lái)有關(guān)睪丸引帶形態(tài)學(xué)方面的研究一直不夠系統(tǒng)深入，不僅影響到睪丸引帶本身的研究，也影響到睪丸乃至整個(gè)生殖系統(tǒng)發(fā)育的進(jìn)一步深入研究。為此，本實(shí)驗(yàn)通過(guò)組織學(xué)及組織化學(xué)的實(shí)驗(yàn)方法對(duì)小鼠不同發(fā)育階段睪丸引帶的變化進(jìn)行了較系統(tǒng)的形態(tài)學(xué)研究。
　　材料和方法：
　　8～10周齡SPF級(jí)昆明小鼠90只，按實(shí)驗(yàn)需求隨機(jī)平均分成6組：孕17天組、孕19天組、

3、生后0天組、生后3天組、生后7天組、生后14天組。小鼠按雌雄比例2：1合籠，以檢查發(fā)現(xiàn)陰栓作為受孕標(biāo)志，定為妊娠0天，記為GD0（gestationday，GD）。胎鼠組分別于GD17、GD19時(shí)取材：脫頸椎處死孕鼠，迅速取出胎鼠，應(yīng)用3倍手術(shù)放大鏡和顯微器械解剖獲得胎鼠睪丸引帶，予常規(guī)固定、石蠟包埋。幼鼠組待其自然分娩，以小鼠出生當(dāng)天記為生后0天，計(jì)為PD0（postnatalday，PD）。分別于PD0、PD3、PD7、PD14時(shí)取

4、材：脫頸椎處死小鼠，應(yīng)用3倍手術(shù)放大鏡和顯微器械解剖獲得小鼠睪丸引帶，予常規(guī)固定、石蠟包埋。
　　對(duì)包埋組織塊作4μm厚冠狀位連續(xù)切片進(jìn)行常規(guī)HE染色，VanGieson、Masson特殊染色和波形蛋白（Vimentin）、骨骼肌肌球蛋白（Myosin）及?-平滑肌肌動(dòng)蛋白（SMA）的免疫組織化學(xué)染色研究。并探索應(yīng)用轉(zhuǎn)色重組方法對(duì)Vimentin和Myosin免疫組化染色陽(yáng)性部位進(jìn)行比較。分析不同發(fā)育階段小鼠睪丸引帶組織的形態(tài)和結(jié)

5、構(gòu)，并對(duì)相關(guān)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　結(jié)果：
　　1.HE染色觀察結(jié)果：各實(shí)驗(yàn)組睪丸引帶形態(tài)結(jié)構(gòu)情況基本相同：光鏡下均可見中心間葉組織細(xì)胞稀疏，外周細(xì)胞較密，呈束狀排列。兩者分界明顯。隨著小鼠天齡增加，睪丸引帶外周的細(xì)胞數(shù)量逐步減少，細(xì)胞核間隙逐步加大。粉紅色染色區(qū)域（細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞外基質(zhì)）逐漸增強(qiáng)，條束狀分布現(xiàn)象逐漸明顯。
　　2.經(jīng)單克隆抗波形蛋白（Vimentin）抗體免疫組織化學(xué)染色顯示，睪丸引帶內(nèi)層疏松的間葉組

6、織區(qū)內(nèi)有較強(qiáng)的波形蛋白表達(dá)，外周較致密的細(xì)胞區(qū)內(nèi)有不同程度的波形蛋白弱表達(dá)。其表達(dá)水平在胎鼠睪丸引帶組織中含量較低，隨著小鼠天齡增加，生后睪丸引帶的波形蛋白陽(yáng)性染色部位逐漸增加，顏色加深，且以內(nèi)層疏松的間葉組織區(qū)內(nèi)增加較明顯。在小鼠生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中睪丸引帶波形蛋白的含量呈現(xiàn)出隨天齡增加而逐漸增加的趨勢(shì)，兩者呈正相關(guān)關(guān)系（R=0.990，P<0.01）。
　　3.經(jīng)單克隆抗骨骼肌肌球蛋白（Myosin）抗體免疫組織化學(xué)染色顯示，Myo

7、sin主要表達(dá)于睪丸引帶外周較致密的細(xì)胞區(qū)內(nèi)，而內(nèi)層疏松的間葉組織區(qū)少有表達(dá)。Myosin表達(dá)水平在胎鼠睪丸引帶組織中含量較低，隨著小鼠天齡增加，睪丸引帶的Myosin陽(yáng)性染色部位逐漸增加，特別是在生后7天和14天組，睪丸引帶的Myosin陽(yáng)性染色增加迅速。小鼠睪丸引帶Myosin的含量呈現(xiàn)出隨天齡增加而逐漸增加的趨勢(shì)，其中生前增加較緩，生后增加較快，兩者成正相關(guān)關(guān)系（R=0.999，P<0.01）。
　　4.在小鼠睪丸引帶的不同

8、發(fā)育階段，骨骼肌肌球蛋白的含量明顯比波形蛋白含量高出一倍至數(shù)倍，它們均隨小鼠天齡增加而逐漸增加。圖像經(jīng)軟件轉(zhuǎn)色重組處理后觀察到波形蛋白陽(yáng)性表達(dá)（轉(zhuǎn)化為紅色）區(qū)域與骨骼肌肌球蛋白陽(yáng)性表達(dá)（棕黃色或棕褐色）區(qū)域不同，前者主要表達(dá)于睪丸引帶內(nèi)層疏松的間葉組織區(qū)，后者主要表達(dá)于引帶外周細(xì)胞致密區(qū)。
　　5.經(jīng)單克隆抗?-平滑肌肌動(dòng)蛋白（smoothmuscleactin，SMA）抗體免疫組織化學(xué)染色顯示，隨著小鼠天齡增加，睪丸引帶組織的所

9、有實(shí)驗(yàn)組中，除了在血管壁有陽(yáng)性表達(dá)外，睪丸引帶的外周細(xì)胞致密區(qū)及內(nèi)層疏松的間葉組織區(qū)均未發(fā)現(xiàn)有SMA的表達(dá)。
　　6.經(jīng)VanGieson和Masson特殊染色顯示，在孕17天組的小鼠睪丸引帶組織中，膠原纖維極少，特別是在組織致密區(qū)。在生后7天和14天組的小鼠睪丸引帶組織中，觀察到膠原纖維在外周細(xì)胞致密區(qū)邊緣及中間疏松的間葉組織區(qū)中含量均較高，且膠原纖維的染色明顯加深。隨著小鼠天齡增加，睪丸引帶組織膠原纖維的含量呈現(xiàn)出隨天齡增加而

10、逐漸增加的趨勢(shì)。睪丸引帶組織經(jīng)VanGieson法特殊染色的同時(shí)可見明顯的細(xì)胞橫紋，其染色隨天齡增加逐漸明顯。同時(shí)細(xì)胞形態(tài)也逐漸呈現(xiàn)收縮狀態(tài)。
　　結(jié)論：
　　1.小鼠睪丸引帶組織主要由周圍束狀排列的細(xì)胞較致密區(qū)和中間散在排列的細(xì)胞較稀疏區(qū)構(gòu)成。隨小鼠天齡增加，致密區(qū)細(xì)胞的形態(tài)、數(shù)量、排列等呈現(xiàn)相應(yīng)的變化。
　　2.在小鼠生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中，睪丸引帶組織外周細(xì)胞致密區(qū)可見明顯的細(xì)胞橫紋，同時(shí)有明顯的骨骼肌肌球蛋白表達(dá)，且隨

11、天齡增加逐漸增加，并可見細(xì)胞形態(tài)逐漸呈現(xiàn)收縮狀態(tài)。
　　3.在小鼠生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中，胚胎期睪丸引帶組織膠原纖維和波形蛋白含量低，生后逐漸增加，它們均主要存在于引帶組織中間疏松的間葉組織區(qū)。
　　4.在小鼠生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中，睪丸引帶組織骨骼肌肌球蛋白和波形蛋白均隨小鼠天齡增加而逐漸增加（但表達(dá)區(qū)域不盡相同），前者含量明顯高于后者。
　　5.在小鼠生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中，睪丸引帶組織內(nèi)僅血管壁有平滑肌肌動(dòng)蛋白陽(yáng)性表達(dá)。
　　上述