豬蛔蟲GST基因的克隆與多態(tài)性分析及其在不同發(fā)育階段中的表達(dá).pdf

1、豬蛔蟲(Ascaris suum Goeze1782)是豬體內(nèi)最大的腸道寄生蟲之一，能感染豬從而造成嚴(yán)重的幼蟲移行癥和生長障礙，甚至死亡，給養(yǎng)豬業(yè)帶來巨大的經(jīng)濟(jì)損失。豬蛔蟲?。⊿wine ascariasis）在世界范圍內(nèi)普遍流行，無論是集約化養(yǎng)殖還是農(nóng)戶散養(yǎng)的豬群均易感染豬蛔蟲而引起該病的發(fā)生，我國豬群的感染率亦在10％～80％。另外，研究發(fā)現(xiàn)，豬蛔蟲還可以感染雞、牛、羊及靈長類等動物和人類，是一種易被忽視的人獸共患寄生蟲病，不僅會給

2、畜禽養(yǎng)殖造成重大損失，還會對人類健康帶來嚴(yán)重的威脅。所以，控制豬蛔蟲對畜牧業(yè)健康發(fā)展和公共衛(wèi)生安全都具有重要的意義。為了更有針對性地防控豬蛔蟲的感染和流行，必須尋找更為有效的疫苗候選基因和藥物靶位，而谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶(Gultathione S transferases，GSTs)系統(tǒng)作為線蟲主要解毒機(jī)制，是一個理想的研究目標(biāo)。多年來，關(guān)于GST基因的研究很多，但對豬蛔蟲GST基因的研究相對不足。故而，本研究擬對豬蛔蟲GST基因編碼序

3、列(Coding sequence，CDS)進(jìn)行克隆并對其結(jié)構(gòu)和抗原表位進(jìn)行預(yù)測，以分析其作為疫苗候選基因的可能性;對西北地區(qū)豬蛔蟲GST基因單核苷酸多態(tài)性（Single nucleotide polymorphism，SNP）位點進(jìn)行篩選和鑒定并統(tǒng)計各SNP位點等位基因和基因型頻率，以分析該基因的遺傳多態(tài)性;對不同發(fā)育階段豬蛔蟲GST基因表達(dá)進(jìn)行檢測并分析藥物對蟲卵和成蟲GST基因表達(dá)的影響，以分析該基因在豬蛔蟲發(fā)育過程和藥物代謝過程

4、中的作用。獲得的結(jié)果如下:
　　1.陜西扶風(fēng)分離到的豬蛔蟲GST基因與豬蛔蟲和人蛔蟲參考基因相似性均為99.5％，但該基因CDS區(qū)的第243和248位核苷酸發(fā)生了突變，并導(dǎo)致編碼的第83位氨基酸發(fā)生改變，另外，預(yù)測顯示，該區(qū)域二級結(jié)構(gòu)和抗原表位均十分豐富，且優(yōu)勢抗原表位最可能出現(xiàn)在肽段43～46和201～204區(qū)域內(nèi)或附近。
　　2.西北地區(qū)豬蛔蟲GST基因存在3個SNP位點，分別為SNP2、SNP3和SNP4，各SNP位點

5、優(yōu)勢等位基因分別為A2、 C3和A4，優(yōu)勢基因型分別為A2A2、 C3C3和A4G4，共形成8個單倍型，同時，各SNP在各地豬蛔蟲群體中均呈中度多態(tài)(0.25＜PIC＜0.50)，且采自陜西地區(qū)的豬蛔蟲GST基因各SNP位點及甘肅地區(qū)的豬蛔蟲GST基因SNP4位點偏離了哈迪溫伯格平衡(P＜0.05)。
　　3.豬蛔蟲蟲卵體外發(fā)育以二分裂的方式進(jìn)行，另外，GST基因在豬蛔蟲不同發(fā)育階段表達(dá)穩(wěn)定且沒有差異，但藥物會引起成蟲和蟲卵該基因