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文檔簡介
1、香菇(Lentinula edodes(Berk.)Pegler)是著名的大型木腐真菌,在我國有已有800多年的栽培歷史。 香菇子實體的形成是香菇生活史中最復雜的發(fā)育過程,需要遺傳、環(huán)境、生理等因素的協(xié)同作用。在香菇子實體發(fā)育的起始階段中,菌絲首先在營養(yǎng)逆境的脅迫下進行局部地聚集而形成扭結體,隨后扭結體的密度逐漸增加而形成致密菌絲團,致密菌絲團最終發(fā)育為原基,原基本質(zhì)上是子實體的胚胎結構。本文建立了適合香菇不同發(fā)育階段組織的RN
2、A高效提取方法,與其他常規(guī)RNA提取方法相比,該方法的獨特之處在于用有機溶劑抽提之前,加入了飽和Nacl溶液,從而促進了多糖物質(zhì)與蛋白質(zhì)的去除,并提高了RNA的產(chǎn)量,為下游的分子生物學操作打下了基礎。另外,本文運用mRNA差異顯示技術比較了香菇菌絲體、菌絲扭結體、致密菌絲團以及原基等四個發(fā)育階段的基因表達差異。四個發(fā)育階段的組織提取RNA后進行反轉(zhuǎn)錄,之后用隨機引物與錨定引物組合對cDNA樣品進行擴增,再用瓊脂糖凝膠電泳進行差異條帶的展
3、示。結果表明四個發(fā)育階段的基因表達差異不甚明顯,最終挑選了17個差異表達的ESTs基因片段進行克隆測序。通過與Gene Bank數(shù)據(jù)庫的比對,發(fā)現(xiàn)這些ESTs片段涉及蛋白質(zhì)的合成、細胞壁的修飾、菌絲間的相互作用、碳氮源的代謝、物質(zhì)的運輸、信號傳導、細胞的復蘇等過程。其中,一個差異片段被證實為內(nèi)切多聚半乳糖醛酸酶基因,通過Real-time PCR定量分析,發(fā)現(xiàn)該基因在疏松菌絲體、菌絲扭結體和致密菌絲團等三個階段的表達相對較低,而在原基發(fā)
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