清肺培元顆粒對免疫低下肺部感染BALB-c小鼠模型IL-17、JAK-STAT信號通路的影響.pdf

1、目的：通過建立免疫低下肺部感染BALB/c小鼠模型，探討清肺培元顆粒對免疫低下肺部感染小鼠血清中細(xì)胞因子IL-17表達(dá)及肺組織JAK2-STAT3信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路活化的影響，闡述清肺培元顆粒治療免疫低下肺部感染的部分作用機(jī)制，為清肺培元顆粒的臨床應(yīng)用以及今后的進(jìn)一步研究提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：（1）造模及給藥：將60只清潔級健康雌性BALB/c小鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)3天后，隨機(jī)抽取12只做為正常組，其余小鼠腹腔注射FLV病毒，21天后鼻腔滴

2、注肺炎鏈球菌，建立免疫低下肺部感染小鼠模型。造模成功后，將造模小鼠按隨機(jī)數(shù)字表法分為4組：免疫低下肺部感染模型組（模型組）、齊多夫定組、唐草片組、清肺培元組。各用藥組小鼠每天灌胃相應(yīng)的藥物，正常組、模型組灌胃同體積生理鹽水，連續(xù)灌胃14天。（2）指標(biāo)測定：實(shí)驗(yàn)中觀察記錄小鼠的一般狀況，末次給藥后6小時，采血分離血清，解剖取肺臟組織，-80℃保存。酶聯(lián)免疫吸附法測定各組小鼠血清中IL-17含量變化；Western Blot技術(shù)檢測各組小鼠

3、肺組織中JAK2、p-STAT3蛋白表達(dá)；Real time PCR技術(shù)檢測各組小鼠肺組織中JAK2、STAT3 mRNA表達(dá)。（3）統(tǒng)計分析：對IL-17、JAK2、p-STAT3蛋白表達(dá)檢測結(jié)果采用SPSS17.0軟件進(jìn)行分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義；JAK2、STAT3 mRNA表達(dá)結(jié)果采用2-ΔΔCt法比較組間差異，2-ΔΔCt＞2或2-ΔΔCt＜0.5為差異有意義。
　　結(jié)果：（1）小鼠一般情況變化：免疫低下肺部

4、感染BALB/c小鼠模型構(gòu)建成功，清肺培元顆粒、齊多夫定、唐草片對模型小鼠一般狀況均有改善作用，小鼠體重增加，呼吸困難等癥狀的嚴(yán)重程度減輕，尤以清肺培元組最為明顯，具體表現(xiàn)為咳嗽、喘息潛伏期延長，腹肌抽搐不明顯，狀態(tài)較活躍，皮毛色澤較好。齊多夫定組、唐草片組對小鼠改善情況次之。（2）各組小鼠血清中IL-17水平變化：模型組小鼠血清中IL-17表達(dá)水平較正常組升高（P＜0.05）；清肺培元組IL-17表達(dá)量低于模型組（P＜0.05），齊多

5、夫定組、唐草片組IL-17表達(dá)水平與模型組之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。（3）各組小鼠肺組織JAK2蛋白表達(dá)水平變化：模型組小鼠肺組織JAK2蛋白表達(dá)高于正常組（P＜0.05）；與模型組對比，各用藥組JAK2蛋白表達(dá)均降低（P＜0.05）；各用藥組之間對比，清肺培元組JAK2蛋白表達(dá)水平低于齊多夫定組、唐草片組（P＜0.05），而齊多夫定組與唐草片組之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。（4）各組小鼠肺組織JAK2 mRNA表達(dá)

6、水平變化：模型組小鼠肺組織JAK2 mRNA表達(dá)高于正常組（2-ΔΔCt＞2）；各用藥組JAK2 mRNA表達(dá)較模型組均降低（2-ΔΔCt＜0.5）；清肺培元組與齊多夫定組對比，JAK2 mRNA表達(dá)水平降低，差異有意義（2-ΔΔCt＜0.5），清肺培元組與唐草片組對比，JAK2 mRNA相對表達(dá)量差異無意義（0.5＜2-ΔΔCt＜2）。（5）小鼠肺組織p-STAT3蛋白表達(dá)水平變化：模型組小鼠肺組織p-STAT3蛋白表達(dá)高于正常組（P

7、＜0.05）；與模型組對比，清肺培元組、唐草片組p-STAT3蛋白表達(dá)降低（P＜0.05），齊多夫定組p-STAT3蛋白表達(dá)升高（P＜0.05）；用藥組之間對比，清肺培元組p-STAT3蛋白表達(dá)低于唐草片組、齊多夫定組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。（6）小鼠肺組織STAT3mRNA表達(dá)水平變化：模型組小鼠肺組織STAT3 mRNA表達(dá)高于正常組（2-ΔΔCt＞2）；清肺培元組、齊多夫定組STAT3 mRNA表達(dá)水平較模型組均降低（

8、2-ΔΔCt＜0.5），唐草片組與模型組比較STAT3 mRNA表達(dá)差異無意義（0.5＜2-ΔΔCt＜2）；清肺培元組STAT3 mRNA表達(dá)低于唐草片組（2-ΔΔCt＜0.5），清肺培元組與齊多夫定組對比STAT3 mRNA表達(dá)差異無意義（0.5＜2-ΔΔCt＜2）。
　　結(jié)論：（1）清肺培元顆?？梢愿纳泼庖叩拖路尾扛腥灸Ｐ托∈蟮囊话闱闆r，從小鼠行為活動指征方面驗(yàn)證了清肺培元顆粒的有效性。（2）IL-17表達(dá)的升高及JAK2-S

9、TAT3信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的活化與免疫低下肺部感染的發(fā)生機(jī)制密切相關(guān)。（3）清肺培元顆?？梢杂行б种菩∈笱逯屑?xì)胞因子IL-17的表達(dá)，提示清肺培元顆粒的臨床抗炎作用機(jī)制與抑制 IL-17表達(dá)有關(guān)。（4）清肺培元顆粒能夠抑制JAK2-STAT3信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的活化，降低JAK2蛋白轉(zhuǎn)錄表達(dá)，阻斷JAK2蛋白及STAT3蛋白的激活，抑制p-STAT3蛋白的產(chǎn)生，提示清肺培元顆粒提高免疫力抗炎抗感染的部分作用機(jī)制與抑制JAK2-STAT3信號通路活