轉(zhuǎn)錄因子NF-κB、AP-1在清肺培元顆粒干預(yù)免疫低下肺部感染BALB-c小鼠模型免疫與炎癥進程中的作用研究.pdf

1、目的：研究清肺培元顆粒對免疫低下肺部感染 BALB/c小鼠模型轉(zhuǎn)錄因子NF-κB、AP-1蛋白及mRNA的影響，探討清肺培元顆粒防治免疫低下肺部感染可能的分子生物學(xué)機制，為清肺培元顆粒臨床應(yīng)用提供實驗依據(jù)，也為開發(fā)防治免疫低下肺部感染有效藥物進行有益探索。
　　方法：
　　1.動物分組:首先將60只BALB/c雌性小鼠分為2組，一組為正常組12只，另一組為造模組48只，造模成功后，按照隨機數(shù)字表法將造模組隨機分為4組，即模型

2、組、齊多夫定組（AZT）組、唐草片組、清肺培元組，用苦味酸溶液染色標(biāo)記以示區(qū)分。
　　2.模型建立:適應(yīng)性飼養(yǎng)3d后，正常組給予一次性腹腔注射生理鹽水0.25mL/10g，造模組亦采用同樣方法均給予等體積的FLV病毒原液，確定造模時間周期為21d（依據(jù)FLV病毒致病特點），在免疫低下小鼠模型成功建立的基礎(chǔ)上，進行麻醉（0.03-0.05mL10％水合氯醛腹腔注射）后，采用滴鼻法給予Ⅲ型肺炎鏈球菌細(xì)菌懸液50μl進行造模，根據(jù)Ⅲ型肺

3、炎鏈球菌致病特點，確定造模周期為7d，確定模型成功后進行灌藥干預(yù)。
　　3.模型給藥:在確定造模成功1d后，開始對各組小鼠灌胃進行相應(yīng)藥物干預(yù)，齊多夫定組給予齊多夫定藥物懸液（0.08g/kg.d），連續(xù)14d；唐草片組給予唐草片藥物懸液（2.56g/kg.d），連續(xù)14d；清肺培元組給予清肺培元顆粒藥物懸液（2g/kg.d），連續(xù)14d；正常組、模型組給予氯化鈉溶液（0.9%），14d時間持續(xù)給藥，嚴(yán)格按照1次/天的頻率和0.2

4、mL·10g-1給藥體積進行藥物干預(yù)。
　　4.指標(biāo)檢測:實驗中觀察記錄小鼠的飲食攝水、活動情況、皮毛色澤、呼吸狀況等行為特征狀況變化，對體重、腹部膨脹程度進行動態(tài)測量，末次給藥6小時后，麻醉使其死亡，無菌操作取出肺臟，分為兩部分，標(biāo)記并分別存放于凍存管，-80℃冰箱深凍保存。一部分用Western Blot方法對各組小鼠肺組織NF-κB p65、AP-1 c-fos、c-jun蛋白的表達(dá)情況進行測定；另一部分用Real-time

5、 PCR方法測定各組小鼠NF-κB p65、AP-1 c-fos、c-jun mRNA表達(dá)情況。
　　結(jié)果：
　　1.各治療組小鼠與模型組對比一般情況均有不同程度地改善；
　　2.模型組小鼠肺組織NF-κB p65、AP-1 c-jun、c-fos蛋白及mRNA表達(dá)較正常組均顯著升高，具有統(tǒng)計學(xué)差異；
　　3.清肺培元組及其它各治療組與模型組比較，NF-κB p65蛋白均顯著降低，具有統(tǒng)計學(xué)差異；清肺培元組與AZ

6、T組、唐草片組比較，NF-κB p65蛋白表達(dá)較低，具有統(tǒng)計學(xué)差異；
　　4.清肺培元組、齊多夫定組與模型組比較，2-△△Ct＜0.5，說明清肺培元組、齊多夫定組NF-κB p65 mRNA表達(dá)較模型組顯著降低；唐草片組與模型組比較，0.5＜2-△△Ct＜2，說明唐草片組NF-κB p65 mRNA表達(dá)與模型組無差異；清肺培元組與唐草片組比較，2-△△Ct＜0.5，說明清肺培元組NF-κB p65 mRNA表達(dá)較唐草片組顯著降低；

7、清肺培元組與齊多夫定組比較，0.5＜2-△△Ct＜2，說明兩組NF-κB p65 mRNA表達(dá)無差異；
　　5.清肺培元組及其它各治療組與模型組比較，AP-1 c-fos蛋白均降低，具有統(tǒng)計學(xué)差異；清肺培元組與 AZT組比較，AP-1 c-fos蛋白表達(dá)較高，具有統(tǒng)計學(xué)差異；清肺培元組與唐草片組比較，AP-1 c-fos蛋白表達(dá)較低，具有統(tǒng)計學(xué)差異;
　　6.清肺培元組、唐草片組、齊多夫定組與模型組比較，2-△△Ct＜0.5

8、，說明清肺培元組、齊多夫定組AP-1 c-fos mRNA表達(dá)較模型組顯著降低；唐草片組與清肺培元組比較，0.5＜2-△△Ct＜2，說明唐草片組AP-1 c-fos mRNA表達(dá)與模型組、清肺培元組無差異；清肺培元組與齊多夫定組比較，2＜2-△△Ct，說明清肺培元組AP-1 c-fos mRNA表達(dá)較齊多夫定組顯著升高。
　　7.清肺培元組、AZT組與模型組比較，AP-1 c-jun蛋白均降低，具有統(tǒng)計學(xué)差異；唐草片組與模型組比較

9、，兩組AP-1 c-jun蛋白表達(dá)無統(tǒng)計學(xué)差異;清肺培元組與AZT組、唐草片組比較，AP-1 c-jun蛋白表達(dá)較低，具有統(tǒng)計學(xué)差異。
　　8.清肺培元組、唐草片組、齊多夫定組與模型組比較，2-△△Ct＜0.5，說明清肺培元組、唐草片組、齊多夫定組AP-1 c-jun mRNA表達(dá)較模型組顯著降低；清肺培元組與唐草片組比較，0.5＜2-△△Ct＜2，說明兩組AP-1 c-jun mRNA表達(dá)無差異；清肺培元組與齊多夫定組比較，2-

10、△△Ct＜0.5，說明清肺培元組AP-1 c-jun mRNA表達(dá)較齊多夫定組顯著降低。
　　結(jié)論：
　　1.清肺培元顆?？梢愿纳颇Ｐ托∈笠话闱闆r，驗證了清肺培元顆粒治療免疫低下肺部感染的有效性。
　　2.轉(zhuǎn)錄因子NF-κB、AP-1的活化與免疫低下肺部感染的發(fā)生機制密切相關(guān)。
　　3.清肺培元顆粒能夠有效抑制轉(zhuǎn)錄因子 NF-κB、AP-1的活化，調(diào)控相關(guān)免疫和炎癥介質(zhì)的產(chǎn)生，從而控制炎癥反應(yīng)、改善免疫低下肺部感