NF-κB p65反義寡核苷酸對TNBS誘導(dǎo)BALB-C小鼠結(jié)腸炎癥的影響.pdf

1、第一部分
　　 目的:
　　 探討不同劑量的TNBS直腸灌注誘導(dǎo)BALB/C小鼠炎癥性腸病模型的特點,從疾病活動指數(shù)、生存率、腸道黏膜病理改變等方面綜合評估,選擇最佳造模劑量,建立最適于本實驗要求的動物模型。
　　 方法:
　　 將禁食24小時、不禁飲的BALB/C小鼠隨機分為5組,每組16只。第一組直腸灌注1.0mgTNBS+50％乙醇溶液,第二組直腸灌注1.5mgTNBS+50％乙醇溶液,第三組直腸灌

2、注2.0mgTNBS+50％乙醇溶液,第四組直腸灌注2.5mgTNBS+50％乙醇溶液,對照組直腸灌注生理鹽水,觀察各小鼠每日表現(xiàn)、稱重、化驗大便常規(guī)、潛血。灌腸后第二天起每天統(tǒng)計生存率,第7天統(tǒng)計總生存率,并處死小鼠,收集標(biāo)本,光鏡下觀察腸黏膜病理特征并評分,檢測各組小鼠腸黏膜內(nèi)NF-κ B p65的表達(dá),分析結(jié)果。
　　 結(jié)果:
　　 各組小鼠(按TNBS1mg、1.5mg、2.0mg、2.5mg組、空白對照順序排列

3、)DAI評分:5.12±0.68、6.36±0.71、11.54±1.28、12.75±1.62、0；病理病理評分:4.26±0.78、5.26±0.98、10.32±1.15、10.72±1.35、1.95±0.50；生存率:100％、93.7％、62.5％、37.5％、100％,NF-κB p65陽性細(xì)胞表達(dá)評分:23.06±2.88、25.26±2.37、50.26±4.26、55.26±4.68、1.26±0.86。從結(jié)果可以發(fā)

4、現(xiàn):隨著TNBS劑量的增加,DAI評分、腸道病理評分逐漸升高,TNBS1mg、1.5mg組與TNBS2.0mg、2.5mg組相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),與對照組相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);TNBS1.0mg、1.5mg組和TNBS2.0mg、2.5mg組兩組組內(nèi)比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。隨著劑量的增加,小鼠的生存率急劇下降,其中2.0mg組與1.0mg、1.5mg、2.5mg組相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0

5、.05)；而NF-κB p65在2.0mg、2.5mg組間相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),與1mg、1.5mg組相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 綜合比較各組小鼠的疾病活動指數(shù)、生存率、病理變化等指標(biāo),TNBS2.0mg能夠誘導(dǎo)出理想的適宜研究的動物模型。因此確定TNBS2.0mg是最佳的造模劑量。
　　 第二部分
　　 目的:
　　 探討NF-κB p65反義寡核

6、苷酸對TNBS誘導(dǎo)BALB/C小鼠炎癥性腸病模型腸道炎癥,TNF-α、IL-1βmRNA及NF-κB p65、TNF-α、IL-10、IL-1β蛋白表達(dá)表達(dá)的影響,研究其對實驗性小鼠結(jié)腸炎的治療效果及機制。
　　 方法:
　　 建立2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)炎癥性腸病小鼠模型,將造模成功的36只BALB/C小鼠隨機分為模型對照組(UC組)、NF-κB p65反義寡核苷酸組(ASODN組),錯義寡核苷酸組(MSO

7、DN組),另設(shè)正常對照組(NC組)。ASODN組、MSODN組小鼠分別于造模后24小時,采用反義寡核苷酸、錯義寡核苷酸灌腸治療,觀察各小鼠每日表現(xiàn)、稱重、化驗大便常規(guī)、潛血；于灌腸后第7天處死小鼠,光鏡下觀察腸道炎癥并評分,逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCT)檢測結(jié)腸組織TNF-α、IL-1βmRNA表達(dá),免疫組化法檢測腸黏膜中TNF-α、IL-1β、IL-10、NF-κB p65陽性細(xì)胞表達(dá),Western blot檢測小鼠結(jié)腸組織核蛋

8、白中NF-κB p65的表達(dá)水平。分析檢測結(jié)果。
　　 結(jié)果:
　　 各組小鼠(按NC組、ASODN組、MSODN組、UC組順序排列)DAI評分為:1.02±0.26、4.36±0.54、11.76±1.21、12.02±1.18;病理評分為:1.95±0.50、5.26±0.88、10.40±1.28、10.32±1.25;RT-PCR檢測TNF-αmRNA表達(dá)為:0.36±0.04、0.64±0.05、1.29±0.

9、05、1.25±0.07,IL-1β mRNA表達(dá)為:0.21±0.04、0.46±0.03、1.00±0.07、1.00±0.03；免疫組化檢測TNF-α陽性細(xì)胞為:64.17±11.29、82.68±14.30、166.49±11.63、168.48±11.89,IL-1β陽性細(xì)胞為:11.68±3.52、42.42±5.77、120.43±28.2、115.74±27.63,IL-10陽性細(xì)胞為:168.32±10.66、146.

10、68±6.02、58.44±10.92、62.50±11.57,NF-κB p65陽性細(xì)胞為:2.42±1.37、22.66±5.32、61.09±3.73、58.38±4.49；Western blot檢測核內(nèi)NF-κB p6蛋白水平為:0.372±0.02、1.05±0.09、2.34±0.09、2.36±0.08。從結(jié)果發(fā)現(xiàn)ASODN組DAI、腸道病理評分、TNF-α、IL-1β mRNA、TNF-α、IL-1β陽性細(xì)胞、NF-κ

11、B p65陽性細(xì)胞及核蛋白內(nèi)NF-κB p65蛋白水平較UC組、MSODN組明顯降低(P<0.05),高于NC組(P<0.05),差異有統(tǒng)計學(xué)意義,；而IL-10陽性細(xì)胞較UC組、MSODN組高(P<0.05),低于NC組(P<0.05),差異有統(tǒng)計學(xué)意義；而UC組、MSODN組組內(nèi)各項指標(biāo)比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)
　　 結(jié)論:
　　 1、NF-κBp65 ASODN干預(yù)TNBS誘導(dǎo)的炎癥性腸病模型小鼠,小