核因子-κBp65反義寡核苷酸對肝星狀細胞增殖、NF-κB活性、ICAM-1及TGF-β-,1-的影響.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:通過轉染NF-kBp65反義寡核苷酸(ASODN)進入大鼠肝星狀細胞(HSC-T6)，了解HSC的增殖和NF-kB活性，以及其產生細胞間粘附分子-1(ICAM-1)及轉化生長因子-β1(TGF-β1)的改變，探討NF-kBp65 ASODN治療肝纖維化的可能機制，為利用NF-kBp65 ASODN治療肝纖維化提供理論基礎。 方法:取第3-6代生長良好的HSC細胞，人工合成NF-kBp65 ASODN并行全程硫代磷酸化修飾。

2、脂質體轉染法轉染NF-kBp65 ASODN進HSC，臺盼藍染色排斥法檢測NF-kBp65 ASODN對HSC的毒性實驗和MTT法測定脂質體轉染NF-kBp65 ASODN對HSC增殖的影響。應用RT-PCR和ELISA方法檢測脂質體介導的不同濃度NF-kBp65 ASODN(0、0.001、0.01、0.1、1μmol/L)對TNF-α刺激HSC產生ICAM-1及TGF-β1 mRNA和蛋白的影響，EMSA法檢測NF-kBp65ASO

3、DN對TNF-α刺激HSC的NF-kB活性影響。 結果:毒性實驗表明NF-kBp65 ASODN在0.001～1μmol/L濃度對于體外培養(yǎng)傳代大鼠HSC無明顯毒性。TNF-α刺激HSC后，NF-kB活性和ICAM-1、TGF-β1的表達顯著性增強(P<0.05)；應用NF-kBp65 ASODN(0.001～1.0μmol/L)作用后，NF-kB活性明顯減弱，且呈劑量依賴性(p<0.05)，同時TGF-β1、ICAM-1的mR

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