骨橋蛋白BALB-c哮喘小鼠肺組織中表達及地塞米松的干預作用.pdf

1、目的：
　　建立OVA致敏和激發(fā)的哮喘小鼠模型;探討不同程度的哮喘氣道炎癥與骨橋蛋白(OPN)的表達的相關性;探討地塞米松(DXM)干預后哮喘小鼠肺組織中OPN的表達情況。
　　方法：
　　4～6周齡、SPF級雌性BALB/c小鼠50只，隨機分為正常組、不同程度哮喘組（卵清蛋白OVA激發(fā)1周組、OVA激發(fā)2周組）及相應的DXM組（DXM治療1周組、DXM治療2周組），每組10只;OVA致敏、激發(fā)建立急性哮喘模型，正常對

2、照組致敏激發(fā)均用等體積的緩沖液(PBS)替代OVA;每只小鼠于取材前腹腔注射10％水合氯醛0.1 mL麻醉，最后一次激發(fā)后24小時內(nèi)斷頸處死小鼠，行左心取血，低溫離心后取上清，用于ELISA分析。取新鮮雙肺組織，將左肺以10倍體積的4％多聚甲醛溶液固定，常規(guī)方法石蠟包埋、切片，行HE染色及免疫組織化學檢測。按肺葉結構解剖右肺，分裝后液氮凍存用于western blot法及Real-time PCR法分析。HE染色觀察各組小鼠氣道炎癥情況

3、;ELISA法檢測血清OVA-sIgE水平;免疫組化和Western blot法分別定位和定量分析肺組織OPN表達;Real-time PCR檢測肺組織OPN mRNA水平。
　　結果：
　　1、肺組織病理改變
　　HE染色可見正常組小鼠支氣管管壁完整光滑，上皮細胞排列整齊，管腔無狹窄，支氣管及周圍血管組織無明顯炎性細胞浸潤。哮喘組小鼠支氣管管壁完整性受損，上皮細胞排列紊亂、脫落，管腔明顯縮窄;支氣管及周圍血管組織可見

4、大量的炎性細胞浸潤;并且在哮喘組中，OVA激發(fā)2周組上述病理學改變較OVA激發(fā)1周組重。
　　2、血清OVA-sIgE水平
　　ELISA結果顯示，哮喘組小鼠血清OVA-sIgE明顯高于正常組(P＜0.01);哮喘組中，激發(fā)2周組血清OVA-sIgE水平較激發(fā)1周組明顯升高(P＜0.01);DXM組血清OVA-sIgE水平低于哮喘組且高于正常組(P＜0.01);DXM組中，治療2周組與治療1周組差異無明顯統(tǒng)計學意義(P=0.

5、549)。
　　3、OPN在肺組織中的定位表達
　　免疫組化法結果顯示，OPN在肺組織表達主要定位于支氣管上皮及氣道和血管周圍浸潤的炎癥細胞;經(jīng)圖像分析，哮喘組肺組織OPN表達（OVA-1周組:44.8±3.5;OVA-2周組:66.3±4.9）高于正常組（11.5±2.8）;其中，OVA激發(fā)2周組表達高于激發(fā)1周組;DXM組OPN表達（DXM-1周組:29.2±3.7:DXM-2周組:28.5±3.3）低于哮喘組;上述各組

6、之間差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。
　　4、Western blot分析肺組織OPN的表達
　　Western blot結果顯示，哮喘組小鼠肺組織OPN表達明顯高于正常組(P＜0.01);哮喘組中，激發(fā)2周組OPN水平較激發(fā)1周組明顯升高(P＜0.01);DXM組OPN水平低于哮喘組卻高于正常組(P＜0.01);DXM組中，治療2周組與治療1周組差異無明顯統(tǒng)計學意義(P=0.925)。，
　　5、Real-tim

7、e PCR檢測肺組織OPN mRNA的相對表達量
　　Real-time PCR結果顯示，哮喘組小鼠肺組織OPN mRNA相對表達明顯高于正常組(P＜0.01);哮喘組中，激發(fā)2周組OPN mRNA水平較激發(fā)1周組明顯升高(P＜0.01);DXM組OPN mRNA水平低于哮喘組卻高于正常組(P＜0.01);DXM組中，治療2周組與治療1周組差異無明顯統(tǒng)計學意義(P=0.928)。
　　結論：
　　OPN可能是哮喘發(fā)病機