RANTES在哮喘大鼠肺組織的表達(dá)及維生素D的干預(yù)作用.pdf

1、中國(guó)醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文RANTES在哮喘大鼠肺組織的表達(dá)及維生素D的干預(yù)作用姓名：陳偉偉申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：臨床醫(yī)學(xué)；兒科學(xué)指導(dǎo)教師：蔡栩栩201204代替OVA進(jìn)行致敏和激發(fā)；末次激發(fā)后24小時(shí)內(nèi)取材，對(duì)各組大鼠進(jìn)行氣道平滑肌細(xì)胞(airwaysmoothmusclecells，ASMCs)原代培養(yǎng)；肺組織石蠟包埋切片后行HE染色觀察病理變化；ELISA法檢測(cè)各組支氣管肺泡灌洗液(bronchoalveolarlavageflu

2、id，BALF)中趨化因子RANTES的含量；免疫組化方法測(cè)定各組肺組織RANTES蛋白的表達(dá)情況：實(shí)時(shí)定量PCR測(cè)定各組肺組織及ASMCs中RANTESmRNA的表達(dá)。另取哮喘組大鼠進(jìn)行ASMCs的原代培養(yǎng)，培養(yǎng)至46代時(shí)，將長(zhǎng)至80％融合的細(xì)胞用含01％dx牛血清的培養(yǎng)基進(jìn)行同步化處理24小時(shí)；然后分為兩組進(jìn)行1，25(OH)2D3的干預(yù)，一組在相同的時(shí)間點(diǎn)加入不同濃度的1，25(OH)2D3，濃度分別為(0001nM、001nM、

3、O1nM、lnM、10nM、100nM)，另一組細(xì)胞在不同時(shí)間點(diǎn)(相對(duì)腫瘤壞死因子進(jìn)行刺激時(shí)間分別為1h，0h，6h，12ll，or18h)加入相同濃度的l，25(OH)2D3；ELISA法檢測(cè)培養(yǎng)基上清中ASMCs分泌的黜蝌TES的含量。結(jié)果1病理改變：哮喘組大鼠氣道炎癥反應(yīng)最明顯，出現(xiàn)炎癥細(xì)胞侵潤(rùn)、氣道狹窄變形及平滑肌的斷裂，各個(gè)干預(yù)組有不同程度的緩解。2肺組織RANTES蛋白的表達(dá)：哮喘組大鼠肺組織中RANTES蛋白的表達(dá)最強(qiáng)，光

4、密度值為：04352q：0087；維生素D組為：0300士0048；普米克組為：0248士00214；普米克聯(lián)合維生素D治療組的表達(dá)進(jìn)一步下降為：01654士00219，各干預(yù)組與哮喘組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(PO05)；聯(lián)合組與普米克組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(PO05)。3RANTESmRNA的表達(dá)：肺組織中：哮喘組相對(duì)擴(kuò)增倍數(shù)為33695士0592，維生素D組為213110919，與哮喘組相比無(wú)意義(產(chǎn)O377)；普米克組為17488

5、士0399，與哮喘組相比無(wú)意義(P=0059)；聯(lián)合治療組為148040304，與哮喘組相比有意義(P=0021)。ASMCs中；正常組RANTES相對(duì)擴(kuò)增倍數(shù)為：1526士03778，哮喘組為：4289士0881，與正常組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(PO05)；維生素D組為3222a：0499，普米克組為2013士0546，聯(lián)合治療組為15310735，各干預(yù)組與哮喘組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(PO05)。4細(xì)胞水平上的干預(yù)顯示，在一定濃度范圍