維生素D抗感染作用的研究.pdf

1、目的：本課題主要分四個部分，從體內(nèi)、體外研究維生素D對感染免疫的調(diào)節(jié)作用。一、采用小鼠單核巨噬細胞株-RAW264.7，研究1,25-二羥維生素D(1,25(OH)2D3)對LPS刺激后的巨噬細胞功能和自身凋亡的影響；二、采用小鼠單核巨噬細胞株-RAW264.7，研究1，25(OH)2D3對感染金黃色葡萄球菌后巨噬細胞吞噬活性、活性氧生成、及自身凋亡的影響；三、采用C57/BL小鼠，研究1，25(OH)2D3對LPS誘導(dǎo)的急性肺損傷、小

2、鼠體內(nèi)炎癥因子釋放、肺水腫以及小鼠感染性休克發(fā)生后小鼠生存時間的影響；四、采用病例對照研究的方法研究機體內(nèi)維生素D代謝物水平與糖尿病患者肺部感染之間的關(guān)系。
　　 方法：一、巨噬細胞補充1,25(OH)2D324h后，用流式細胞儀檢測細菌脂多糖LPS誘導(dǎo)后巨噬細胞活性氧生成、凋亡率、線粒體跨膜電位和胞內(nèi)游離鈣離子濃度的變化：二、巨噬細胞補充1,25(OH)2D324h后，用流式細胞儀檢測金黃色葡萄球菌(Staphyloccocu

3、s aureus Rosenbach，SA)感染后巨噬細胞吞菌活性、活性氧生成、線粒體跨膜電位和胞內(nèi)游離鈣離子濃度的變化；三、C57/BL小鼠皮下注射1,25(OH)2D3一周后，分別以不同劑量的LPS感染建立急性肺損傷和感染性休克動物模型，ELISA法檢測小鼠血清、心肌和肺組織勻漿中TNF-α的含量，肺組織濕重/干重(W/D)法檢測肺水腫程度，并對發(fā)生感染性休克小鼠的生存時間進行生存分析；四、以糖尿病并發(fā)肺部感染為研究群體，通過病例對

4、照的方法研究血清中維生素D代謝物水平與肺部感染之間的關(guān)系。
　　 結(jié)果：一、LPS誘導(dǎo)實驗結(jié)果顯示，補充1,25(OH)2D3組巨噬細胞凋亡率明顯降低(P<0.05)；線粒體膜電位在lh、3h時明顯偏高(P<0.01)；胞內(nèi)鈣離子濃度偏低但無統(tǒng)計學(xué)差異；釋放的活性氧量在3h明顯增高（P<0.05），lh、6h時明顯偏低（P<0.01），并且膜電位與凋亡率、鈣離子濃度之間活性氧存在良好的相關(guān)性。二、金葡感染實驗結(jié)果顯示，補充l，2

5、5(OH)2D3組巨噬細胞的吞噬活性lh明顯增強(P<0.01)，6h明顯降低(P<0.01)：活性氧釋放量lh顯著升高（P<0.01），3h、6h顯著降低（P<0.01）：線粒體膜電位lh顯著降低（P<0.05），3h顯著增高(P<0.05)：胞內(nèi)鈣離子濃度lh明顯降低(P<0.01)。并且吞噬活性分別與活性氧、鈣離子濃度顯示良好的相關(guān)性。三、感染性休克實驗結(jié)果顯示，補充1,25(OH)2D3組和單純LPS模型組的半數(shù)死亡時間分別為6

6、5h和100.5h。急性肺損傷實驗中，肺W/D結(jié)果顯示尾靜脈注射LPS2.5mg/kg，6h后補充1，25(OH)zD3組肺W/D明顯低于LPS組（P<0.05）；血清中TNF-a濃度顯示注射LPS5.0mg/kg，2h后VD+LPS組比LPS組顯著升高(P<0.01)，LPS2.5mg/kg，2hVD+LPS組明顯低于LPS組（P<0.01），6h明顯高于LPS組(P<0.01)：肺組織中TNF-a濃度顯示注射LPS5.0mg/kg，

7、2h后VD+LPS組比LPS組明顯升高(P<0.05)，LPS2.5mg/kg，2hVD+LPS組明顯高于LPS組(P<0.01)，6h低于LPS組(P<0.05)；心肌組織中TNF-a濃度顯示注射LPS后補充1,25(OH)2D3組均較LPS組有不同程度的升高，5.0mg/kg，2h和2.5mg/kg，6h明顯高于LPS組（P<0.05，P<0.01）。四、糖尿病患者并發(fā)感染主要與GHAlC(％)>10、血清25(OH)D<-20ng