維生素D非經(jīng)典作用的初步研究.pdf

1、維生素D的鈣磷調(diào)節(jié)作用已被人們所熟知，維生素D主要通過(guò)其活性形式與維生素D受體結(jié)合發(fā)揮作用。隨著研究的深入，人們?cè)谠S多與鈣、磷代謝無(wú)關(guān)的組織和細(xì)胞上發(fā)現(xiàn)有維生素D受體。因此維生素D的非經(jīng)典作用引起了人們的重視。目前認(rèn)為維生素D具有更廣泛的生理作用，如調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖、誘導(dǎo)細(xì)胞分化，免疫增強(qiáng)，抗突變等。本文對(duì)維生素D的非經(jīng)典作用進(jìn)行初步的研究。 目的：本課題主要從三個(gè)方面研究維生素D的非經(jīng)典作用：一、活性維生素D(1，25(OH)2

2、D3)對(duì)人卵巢癌細(xì)胞株(SKOV3)的單獨(dú)及聯(lián)合卡鉑(CBP)后的增殖抑制作用。二、維生素D對(duì)γ射線照射引起的小鼠造血損傷和DNA突變的保護(hù)作用。三、活性維生素D缺乏對(duì)脂多糖(Lipopolysaccharide，LPS)誘導(dǎo)的小鼠死亡率及腹腔巨噬細(xì)胞炎性因子TNF-α、NO釋放的影響。 方法：(1)用MTT法測(cè)定不同濃度的1，25(OH)2D3和CBP單獨(dú)作用于SKOV3細(xì)胞后細(xì)胞存活率和細(xì)胞周期的改變，以及不同順序聯(lián)合作用

3、后細(xì)胞存活率的變化情況；(2)以60Co γ射線6.0 Gy一次性全身照射小鼠建立照射損傷模型，觀察維生素D灌胃小鼠外周血細(xì)胞、骨髓細(xì)胞微核率及細(xì)胞周期的變化；(3)以1α羥化酶基因敲除小鼠(1α(OH)ase gene knock out mice)作為活性維生素D缺乏的動(dòng)物模型，觀察LPS引起的小鼠死亡率和腹腔巨噬細(xì)胞腫瘤壞死因子TNF-α和一氧化氮(NO)的釋放情況。 結(jié)果：(1)1，25(OH)2D3作用于SKOV3，

4、使細(xì)胞存活率降低，10-7M 1，25(OH)2D3作用72h后細(xì)胞存活率為72.45％，10-8M 1，25(OH)2D3作用72 h后細(xì)胞存活率為82.11％；并使SKOV3細(xì)胞阻滯于G2期。當(dāng)與CBP聯(lián)合作用時(shí)，效應(yīng)取決于用藥順序。同時(shí)給藥時(shí)，10-7M 1，25(OH)2D3聯(lián)合2×10-5g／L CBP作用下細(xì)胞存活率為11.77％，10-8M 1，25(OH)2D3聯(lián)合2×10-5g／LCBP作用時(shí)細(xì)胞存活率為14.13％。

5、先后給藥時(shí)，抑制細(xì)胞增殖情況不及同時(shí)給藥時(shí)。(2)維生素D能夠一定程度上恢復(fù)照射損傷小鼠的外周血細(xì)胞，照射后第2d，白細(xì)胞升高至3.05×109幾，紅細(xì)胞、血小板計(jì)數(shù)也高于照射組；降低骨髓細(xì)胞微核率至10.34％，使照射引起的骨髓細(xì)胞G1期阻滯縮短，G2期阻滯延長(zhǎng)。(3)LPS誘導(dǎo)1 α羥化酶基因敲除小鼠腹腔巨噬細(xì)胞炎癥因子TNF-α、NO的釋放顯著高于野生型小鼠。LPS腹腔注射后24 h，基因敲除小鼠組和野生型小鼠組動(dòng)物生存率分別為1

6、0％和40％。 結(jié)論：(1)1，25(OH)2D3對(duì)SKOV3細(xì)胞有增殖抑制作用，并呈現(xiàn)劑量效應(yīng)關(guān)系。1，25(OH)2D3與CBP聯(lián)合作用于SKOV3時(shí)，具有雙重作用，作用效果取決于用藥順序，與CBP同時(shí)加入時(shí)，表現(xiàn)為細(xì)胞增殖抑制。在CBP前、后加入時(shí)，表現(xiàn)為拮抗作用。 (2)維生素D對(duì)照射損傷的小鼠具有保護(hù)作用，可升高外周血白細(xì)胞，降低骨髓細(xì)胞微核率。 (3)1，25(OH)2D3對(duì)LPS誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞炎