水通道蛋白4及黏蛋白5AC在哮喘小鼠支氣管肺組織的表達(dá)及地塞米松對(duì)其的影響.pdf

1、目的:觀察水通道蛋白4(AQP4)和黏蛋白5AC(MuC5AC)在哮喘小鼠支氣管肺組織的表達(dá),以及地塞米松對(duì)其表達(dá)的影響,探討AQP4和MuC5AC在哮喘發(fā)病機(jī)制中的作用。
　　方法:將24只清潔級(jí)C57BL/6小鼠隨機(jī)分為對(duì)照組、哮喘組和地塞米松治療組(DEX組),每組8只。哮喘模型組:第0 d及14 d腹腔注射新鮮配制的卵蛋白(OVA)與氫氧化鋁混懸溶液0.2ml(1g/L OVA0.1ml+100g/L氫氧化鋁0.1m1)致

2、敏,在2l、22和23 d予1g/L OVA溶液50ul滴鼻吸入激發(fā)。DEX組:致敏同哮喘組,在滴鼻激發(fā)前30 min予地塞米松1.2 mg/kg腹腔注射。對(duì)照組同時(shí)給予相同體積的生理鹽水腹腔注射及滴鼻。于末次激發(fā)24 h后處死,取肺組織蘇木精-伊紅(HE)染色觀察肺組織形態(tài)學(xué)的改變,阿辛藍(lán)-過碘酸-雪夫染色法(AB-PAS)觀察氣道杯狀細(xì)胞增生和黏液分泌情況,采用病理評(píng)分法評(píng)價(jià)各組差別。免疫組化法檢測(cè)AQP4和MuC5AC蛋白的表達(dá);

3、實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)AQP4和MuC5AC mRNA在肺組織的含量:以SYBR-greenⅠ作熒光指示劑,檢測(cè)AQP4、MuC5AC和管家基因β-actin mRNA的量,采用雙ΔΔCt法計(jì)算目的基因的相對(duì)表達(dá)量。各組數(shù)據(jù)均用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示,各組指標(biāo)的均數(shù)比較均采用SPSS13軟件進(jìn)行單因素方差分析,P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果:(1)肺病理組織HE染色檢查:哮喘組小鼠支氣管、細(xì)支氣管黏膜下和血管周圍有大量的炎

4、癥細(xì)胞浸潤,氣道壁及氣道平滑肌增厚,黏膜下水腫,管腔狹窄,管腔內(nèi)可見黏液栓堵塞,氣道上皮細(xì)胞脫落,杯狀細(xì)胞增多。DEX組支氣管及周圍肺組織病理改變較哮喘組上述改變明顯減輕。對(duì)照組未見上述病理改變。underwood肺組織病理學(xué)評(píng)分哮喘組明顯高于對(duì)照組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),DEX組評(píng)分低于哮喘組,但仍高于對(duì)照組,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。(2)AB-PAS染色結(jié)果:哮喘組小鼠氣道上皮有大量杯狀細(xì)胞增生,管腔內(nèi)可見大量

5、黏液分泌,染色胞漿呈藍(lán)色和紫紅色;DEX組較哮喘組明顯減輕,對(duì)照組黏液分泌不明顯。病理評(píng)分哮喘組明顯高于對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);DEX組評(píng)分低于哮喘組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。(3)免疫組織化學(xué)顯示:肺組織中有AQP4和MuC5AC表達(dá)。AQP4表達(dá)于大小氣道上皮,Ⅰ型肺泡上皮細(xì)胞胞質(zhì)均有表達(dá),尤以氣道上皮細(xì)胞基底部和氣道旁血管周圍,哮喘組表達(dá)呈弱陽性,地塞米松治療后表達(dá)明顯增強(qiáng)哮喘組。MuC5AC主要表達(dá)于

6、氣道基底層,哮喘組表達(dá)呈強(qiáng)陽性,地塞米松治療后表達(dá)減弱。(4)實(shí)時(shí)熒光定量PCR結(jié)果:哮喘組AQP4 mRNA相對(duì)表達(dá)量(1.1923±0.1933)低于對(duì)照組(4.4220±2.1953)及DEX組(2.4132±1.0997),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);與對(duì)照組相比,DEX組AQP4 mRNA表達(dá)量仍減少,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。哮喘組MuC5AC mRNA相對(duì)表達(dá)量(9.1876±3.0894)較對(duì)照組(1.0

7、945±0.1920)及DEX組(2.7621±1.8449)明顯增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),DEX組MuC5AC mRNA表達(dá)量較對(duì)照組增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。相關(guān)關(guān)系分析:AQP4表達(dá)量與MuC5AC表達(dá)量呈負(fù)相關(guān)(r=-0.591, P<0.05)。
　　結(jié)論:(1)成功建立了C57BL/6小鼠哮喘模型。(2)OVA致敏/激發(fā)的哮喘小鼠存在氣道黏液高分泌。(3)OVA致敏/激發(fā)的哮喘小鼠支氣管肺組