氣道酸性微環(huán)境下OGR1介導(dǎo)黏蛋白5AC表達(dá)的研究.pdf

1、目的：明確酸性微環(huán)境誘導(dǎo)下氣道上皮細(xì)胞OGR1蛋白表達(dá)情況，研究OGR1蛋白、ERK蛋白在酸性微環(huán)境誘導(dǎo)下氣道黏蛋白5AC高表達(dá)中的作用，并就酸性微環(huán)境與OGR1/ERK之間的關(guān)系做初步探討。
　　方法：
　　(1)體外培養(yǎng)人氣道上皮細(xì)胞(16HBE)，以氯化氫創(chuàng)造細(xì)胞酸性環(huán)境(pH6.4)，以細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶(ERK)特異性抑制劑PD88059及卵巢癌G蛋白偶聯(lián)受體1(OGR1)siRNA進(jìn)行干預(yù)，將細(xì)胞隨機(jī)分為8組:<

2、br>　?、賹φ战M
　?、谒岽碳そM
　?、鬯岽碳?轉(zhuǎn)染OGR1 siRNA組
　?、?pH7.4+OGR1 siRNA組
　?、菟岽碳?陰性siRNA組
　?、辮H7.4+陰性siRNA組
　?、咚岽碳?PD98059組
　　⑧pH7.4+PD98059組
　　(2)采用四甲基偶氮唑鹽光吸收法(MTT)檢測細(xì)胞活性，逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)測定各組細(xì)胞黏蛋白(MUC)5AC轉(zhuǎn)錄水

3、平，酶聯(lián)免疫反應(yīng)(ELISA)法觀察細(xì)胞黏蛋白5AC裂解液中MUC5AC蛋白水平的改變;
　　(3) Western blot法檢測OGR1蛋白及p-ERK蛋白的相對含量。
　　結(jié)果：
　　(1)酸刺激組內(nèi)細(xì)胞黏蛋白(MUC)5AC轉(zhuǎn)錄及蛋白水平顯著高于對照組（p值均＜0.05），其OGR1及p-ERK蛋白含量較對照組亦明顯增加。
　　(2)酸刺激+轉(zhuǎn)染OGR1 siRNA組MUC5AC mRNA轉(zhuǎn)錄及蛋白水平顯

4、著低于酸刺激組（p值均＜0.05），其p-ERK含量亦明顯降低。而pH7.4+OGR1 siRNA組MUC5AC蛋白含量及mRNA水平較pH7.4對照組無明顯差別，其p-ERK含量也變化不大。
　　(3)酸刺激+PD98059組MUC5AC mRNA轉(zhuǎn)錄及蛋白水平顯著低于酸刺激組（p值均＜0.05），而pH7.4+PD98059組較對照組MUC5ACmRNA轉(zhuǎn)錄及蛋白水平無明顯差異。
　　結(jié)論：
　　(1)在酸性微環(huán)境