CRFR1介導(dǎo)低氧誘導(dǎo)肝細(xì)胞IGFs和IGFBPs表達(dá)的調(diào)節(jié).pdf

1、背景和目的
　　類胰島素樣生長因子（Insulin-like growth factor, IGF）家族包括兩種配體(IGF-Ⅰ和IGF-Ⅱ)，相應(yīng)的細(xì)胞表面受體（IGF-ⅠR和IGF-ⅡR）及六種結(jié)合蛋白(IGFBP1～6)。IGF家族在調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖、存活、分化和遷移等方面具有重要的生物學(xué)功能。研究表明，IGF家族在機(jī)體缺氧或缺血應(yīng)答反應(yīng)中有重要作用，而CRF在低氧應(yīng)激時具有調(diào)節(jié)神經(jīng)內(nèi)分泌和機(jī)體生理功能等重要作用，二者在低氧情況

2、下都可以發(fā)揮細(xì)胞保護(hù)作用，研究低氧應(yīng)激條件下CRF是否可以調(diào)節(jié)IGF家族基因表達(dá)具有重要意義。
　　在整體水平，本實(shí)驗(yàn)室利用低氣壓艙模擬高原低氧，檢測大鼠肝臟組織IGF家族基因表達(dá)的變化;在細(xì)胞水平，給細(xì)胞CRF刺激，檢測大鼠正常肝細(xì)胞系IGF家族基因表達(dá)的變化。目的是研究低氧對大鼠IGF家族基因表達(dá)的影響，分析低氧對細(xì)胞的損傷，以及低氧情況下IGF-Ⅰ的抗凋亡機(jī)制和對細(xì)胞的損傷保護(hù)。并利用大鼠正常肝細(xì)胞(BRL-3A)，進(jìn)一步研

3、究CRF刺激時IGF對細(xì)胞的損傷保護(hù)。并利用CRFR1拮抗劑，探究CRF是否參與了低氧下IGF家族基因的調(diào)節(jié)。
　　實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和方法
　　整體水平研究:實(shí)驗(yàn)室動物SD大鼠暴露于低氧艙模擬低氧，分別為5km(10.8％ O2，54.02 kPa)8 h，24 h，5d和10d，以及CRFR1拮抗劑預(yù)處理組。研究其肝臟IGF-Ⅰ、IGF-Ⅱ、IGFBP1、IGFBP2和IGFBP3等基因和蛋白的表達(dá)變化。
　　細(xì)胞水平研究:

4、利用培養(yǎng)的大鼠正常大鼠肝細(xì)胞BRL-3A，給予CRF(1nM，10nM)處理細(xì)胞24 h，研究不同濃度的CRF處理后細(xì)胞IGF基因的表達(dá)變化。
　　IGF家族基因表達(dá)變化采用實(shí)時定量PCR進(jìn)行檢測。蛋白表達(dá)變化采用ELISA和Western-Blot進(jìn)行檢測。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果
　　1.低氧改變動物肝臟IGFs和IGFBPs基因和蛋白的表達(dá)。急性低氧5km8h和24 h都明顯增加了大鼠肝臟IGF-Ⅰ和IGF-Ⅱ mRNA以

5、及IGF-Ⅰ蛋白的表達(dá)，慢性低氧5km5d和10d都明顯降低了大鼠肝臟IGF-Ⅰ和IGF-Ⅱ mRNA以及IGF-Ⅰ蛋白的表達(dá);低氧明顯增加IGFBP1 mRNA和蛋白的表達(dá)，慢性低氧降低了IGFBP2和IGFBP3 mRNA和蛋白的表達(dá)。
　　2.CRF改變BRL-3A細(xì)胞系的IGF-Ⅰ和IGFBPs mRNA的表達(dá)。給予細(xì)胞外源CRF對IGF-Ⅱ mRNA的表達(dá)沒有影響，明顯增加IGF-Ⅰ和IGFBP1，IGFBP2 mRNA

6、的表達(dá)，明顯降低IGFBP3 mRNA的表達(dá)。
　　3.CRF通過CRFR1參與低氧下IGF家族基因的調(diào)節(jié)。CRFR1拮抗劑可以阻斷低氧誘導(dǎo)的IGF-Ⅰ和IGFBP1 mRNA表達(dá)的上升。
　　小結(jié)
　　急性低氧增加大鼠肝臟組織IGF-Ⅰ和IGF-Ⅱ mRNA以及IGF-Ⅰ蛋白表達(dá)，而慢性低氧降低大鼠肝組織IGF-Ⅰ和IGF-Ⅱ mRNA以及IGF-Ⅰ蛋白的表達(dá)，并且同時調(diào)節(jié)IGFBP1，IGFBP2和IGFBP3 m