弓形蟲(chóng)致BALB-c小鼠卵細(xì)胞和胚胎的毒性作用.pdf

1、目的： 本實(shí)驗(yàn)采用弓形蟲(chóng)感染BALB/c雌鼠，①觀察染蟲(chóng)雌鼠的毒性反應(yīng)，建立生殖毒性的小鼠模型；②染蟲(chóng)雌鼠排卵情況及卵母細(xì)胞染色體的變化；③染蟲(chóng)雌鼠性激素(FSH、LH、E2)水平的變化；④著床前受精卵的發(fā)育情況；⑤孕中期鼠染蟲(chóng)后胚胎的發(fā)育情況，探討弓形蟲(chóng)對(duì)雌鼠生殖功能及胚胎發(fā)育的毒性作用。 方法： (1)建立生殖毒性的小鼠模型：將BALB/c雌鼠(21±0.5g，9-10周)隨機(jī)分為11組，每組10只：A組正常

2、對(duì)照組(PBS)、染蟲(chóng)B組(腹腔注射經(jīng)胰酶消化后的弓形蟲(chóng)速殖子25個(gè)/只/2組、50個(gè)/只/3組、100個(gè)/只/4組、200個(gè)/只/5組、400個(gè)/只/6組)和染蟲(chóng)C組(腹腔注射不經(jīng)胰酶消化的弓形蟲(chóng)速殖子，設(shè)劑量、組數(shù)相同)。觀察小鼠生存情況(20天)。 (2)觀察弓形蟲(chóng)對(duì)卵母細(xì)胞的影響：將BALB/c處女鼠隨機(jī)分為：正常對(duì)照1組(PBS)，染蟲(chóng)組(腹腔注射純化的弓形蟲(chóng)速殖子：25個(gè)/只/2組、50個(gè)/只/3組、100個(gè)/只/4

3、組、200個(gè)/只/5組)，每組10只；染蟲(chóng)3天后超排，取卵母細(xì)胞計(jì)數(shù)、觀察其染色體。 (3)觀察弓形蟲(chóng)對(duì)雌鼠性激素分泌的影響：設(shè)正常對(duì)照組(PBS)和染蟲(chóng)組(腹腔注射純化的弓形蟲(chóng)速殖子200個(gè)/只)，染蟲(chóng)6天后，摘眼球取血，分離血清，用放免法測(cè)定雌鼠在一個(gè)動(dòng)情周期中FSH、LH的水平；并測(cè)定雌鼠妊娠前3天E2的水平。 (4)觀察弓形蟲(chóng)對(duì)受精卵發(fā)育的影響：將BALB/c鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組(PBS)和染蟲(chóng)組(腹腔注射純化的

4、弓形蟲(chóng)速殖子：25個(gè)/只/2組、50個(gè)/只/3組、100個(gè)/只/4組、200個(gè)/只/5組)，3天后超排、合籠、交配，次晨查陰栓，取各組受精鼠，再隨機(jī)分3組，每組10只。觀察妊娠前3天的受精卵、2-細(xì)胞胚、4-細(xì)胞胚、桑椹胚及未受精卵、1-細(xì)胞胚、延遲胚，退化胚的數(shù)量、比率，并取小鼠主要臟器作病理切片，觀察其病理學(xué)變化。 (5)觀察弓形蟲(chóng)感染孕中期BALB/c鼠的胚胎毒性：將受精鼠隨機(jī)分為陰性對(duì)照組(PBS，1組)、染蟲(chóng)組(2～5

5、組)和環(huán)磷酰胺組(6組)，每組10只，孕8天染蟲(chóng)(25個(gè)/只/2組、50個(gè)/只/3組、100個(gè)/只/4組、200個(gè)/只/5組)，孕18天頸椎脫臼處死孕鼠，稱(chēng)雌鼠子宮、胎盤(pán)、胎鼠重量。觀察胎鼠有無(wú)吸收胎、死胎，并計(jì)數(shù)，取出活胎，肉眼觀察其外觀、內(nèi)臟、骨骼有無(wú)畸形。 結(jié)果： (1)胰酶消化組的生存天數(shù)顯著高于未消化組(P＜0.01)，且胰酶消化各組間均有差異(P＜0.05)；雌鼠染蟲(chóng)25個(gè)/只無(wú)毒性反應(yīng)；染蟲(chóng)400個(gè)/只，毒

6、性較大，實(shí)驗(yàn)中全部死亡，可視為致死量。且隨著劑量的增加，生存時(shí)間縮短。 (2)染蟲(chóng)組：25個(gè)/只/2組、50個(gè)/只/3組、100個(gè)/只/4組、200個(gè)/只/5組的卵母細(xì)胞回收數(shù)均低于正常對(duì)照1組(P＜0.05)，3～4組染色體畸變率均高于正常組，但無(wú)顯著性差異(P＞0.05)，5組與正常組比較有顯著性差異(P＜0.05)。 (3)染蟲(chóng)雌鼠的FSH、LH水平與正常對(duì)照組相比：動(dòng)情周期第1天無(wú)明顯變化(P＞0.05)，第2～

7、4天峰值明顯下降(P＜0.05)；妊娠前3天染蟲(chóng)組小鼠E2水平與正常組相比有所下降，但無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。 (4)染蟲(chóng)組48-52h、76-80h、96-102h檢出的胚胎總數(shù)均低于正常組(P＜0.05)，受精卵總數(shù)也低于正常組(P＜0.05)，延遲胚、退化胚均高于正常組(P＜0.05)。 (5)染蟲(chóng)組孕鼠體重與正常組相比明顯下降(P＜0.05)。染蟲(chóng)25個(gè)/只無(wú)胚胎毒性(P＞0.05)。50個(gè)/只對(duì)母鼠胎盤(pán)重

8、、胎鼠重有影響(P＜0.05)。100個(gè)/只和200個(gè)/只對(duì)著床數(shù)、活胎率、吸收胎、死胎率、流產(chǎn)率有影響(P＜0.05)，100個(gè)/只對(duì)胎盤(pán)重量、胎鼠身長(zhǎng)、體重、尾長(zhǎng)影響顯著(P＜0.01)。此外，200個(gè)/只對(duì)吸收胎、死胎率、流產(chǎn)率、畸胎率有顯著影響(P＜0.01)。各主要臟器未見(jiàn)明顯病理學(xué)改變。 結(jié)論： 弓形蟲(chóng)感染BALB/c小鼠采用腹腔注射胰酶消化的弓形蟲(chóng)速殖子的方式最佳。弓形蟲(chóng)感染可致BALB/c雌鼠生殖功能下降