高速逆流色譜分離純化九里香中的黃酮類化合物.pdf

1、中藥是中華民族幾千年燦爛文化的瑰寶,它以“標本兼治”的獨特理念和功效而被人們接受,但中藥與西藥相比,多數(shù)單方及復方制劑的有效物質(zhì)基礎(chǔ)尚不清楚,藥理作用的研究和開發(fā)相對薄弱,限制了中藥的開發(fā)和利用。因此提取其有效成分并進一步加以分離、純化,得到有效單體是中藥研究領(lǐng)域中的一項重要內(nèi)容。由于中藥中的成分十分復雜,所含成分種類繁多,含量有高有低,所以中藥有效成分的提取、分離和精制是一項十分艱巨而細致的工作。而高速逆流色譜(High-Speed

2、Counter-Current Chromatography,HSCCC)作為一種連續(xù)高效的液-液分配色譜分離技術(shù),具有分離速度快、樣品回收率高、成本低等優(yōu)點,非常適合中藥及天然產(chǎn)物中有效成分的分離制備。
　　 九里香[Murraya exotical L.]這一傳統(tǒng)中藥為蕓香科九里香屬植物,其葉及帶葉的嫩枝富含香豆素類、黃酮類化合物。黃酮類化合物作為天然產(chǎn)物的活性成分之一因其具有藥理活性廣、毒性低等特點,同時能夠起到降血脂、降

3、血糖、抗氧化、抗衰老等作用。在近年來的天然產(chǎn)物活性成分的分離純化研究中,倍受國內(nèi)外科學家的關(guān)注。本文建立的從中藥九里香中分離純化黃酮類化合物的方法,對于天然黃酮產(chǎn)物的研究具有一定意義并為其他中藥及天然產(chǎn)物中黃酮類化合物的分離純化提供了技術(shù)依據(jù)。
　　 本實驗利用有機溶劑熱回流法提取出了九里香中的總黃酮,并且通過利用大孔樹脂對九里香總黃酮粗提物進行了進一步的富集,得到了九里香弱極性粗提物及中等極性粗提物,利用高速逆流色譜對兩種極性

4、的粗提物進行分離純化,最終得到了七個高純度的黃酮類化合物。并利用高效液相色譜(HPLC)、核磁共振波譜(NMR)等對目標產(chǎn)物的純度和化學結(jié)構(gòu)進行了分析和鑒定。
　　 在利用HSCCC分離純化九里香弱極性粗提物中的黃酮類化合物的實驗中,以石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水(5:5:4.8:5)作為高速逆流色譜的兩相溶劑系統(tǒng),上相為固定相,下相為流動相；轉(zhuǎn)速:800r/min；流速:2.0mL/min；單次進樣量:200mg;進樣體積:12

5、mL;以此條件成功地從4.0g的九里香粗提物中分離純化出5,7,3’,4’,5’-五甲氧基黃酮(重結(jié)晶后)54.31mg、5-羥基-6,7,3’,4’-四甲氧基黃酮107.68mg、5-羥基-6,7,8,3’,4’-五甲氧基黃酮215.54mg、5-羥基-6,7,8,3’,4’,5’-六甲氧基黃酮84.36mg,純度分別為97.28％、97.56％、98.75％、95.05％。各化合物的結(jié)構(gòu)均由質(zhì)譜(MS)和核磁共振(NMR)氫譜、碳譜

6、鑒定。其中化合物5-羥基-6,7,3’,4’-四甲氧基黃酮為首次從九里香中分離得到。
　　 對于九里香中等極性粗提物本實驗則以正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水(4:6:4:6)作為高速逆流色譜的兩相溶劑系統(tǒng),上相為固定相,下相為流動相；轉(zhuǎn)速:800r/min；流速:2.0mL/mim;單次進樣量:300mg;進樣體積:14mL；以此條件成功地從4.0g的九里香粗提物中分離純化出5,7,3’,4’-四甲氧基黃酮(重結(jié)晶后)30.45mg

7、、5,7,3’,4’,5’-五甲氧基黃酮145.63mg、5,7,8,3’,4’,5’-六甲氧基黃酮34.28mg、5,7,3’,4’,5’-五甲氧基二氫黃酮62.17mg,5-羥基-6,7,3’,4’-四甲氧基黃酮47.95mg。純度分別為97.34％、97.69％、98.12％、96.78％、95.16％。各化合物的結(jié)構(gòu)均由質(zhì)譜(MS)和核磁共振(NMR)氫譜、碳譜鑒定。其中化合物5,7,3’,4’,5’-五甲氧基黃酮和5-羥基-6