PDGF-BB在實(shí)驗(yàn)性大鼠腦局灶性缺血-再灌注模型中表達(dá)的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：腦梗死嚴(yán)重威脅著人類健康，探討腦梗死的病理生理學(xué)機(jī)制，尋求有效的治療手段是研究的熱點(diǎn)。隨著認(rèn)識的不斷深入，人們提出了缺血半暗帶的概念和缺血再灌注損傷級聯(lián)反應(yīng)學(xué)說。腦缺血再灌注損傷機(jī)制包括相互承啟、交互作用的數(shù)個(gè)機(jī)制，如興奮性氨基酸毒性作用、炎癥、細(xì)胞凋亡等。半暗帶是無灌注的中心區(qū)和正常組織間的移行區(qū)，它不是靜止的，隨時(shí)間和治療的進(jìn)行，比如溶栓治療，其大小發(fā)生改變。在以上研究中，血小板衍生生長因子(PDGF)的作用引起人們的重視。作

2、為一種具有多種生物學(xué)功能的細(xì)胞因子，PDGF廣泛參與腦梗死的病理生理過程，國內(nèi)外學(xué)者對PDGF-BB在腫瘤發(fā)生、肺纖維化、動脈粥樣硬化、創(chuàng)傷修復(fù)等病理過程中所起的作用研究較多，但對它在腦缺血再灌注損傷中的實(shí)驗(yàn)研究很少。因此本實(shí)驗(yàn)通過建立腦缺血再灌注動物模型，探討PDGF-BB的表達(dá)及其意義，尋求有效的神經(jīng)保護(hù)劑。 方法：60只健康成年雄性Sprague-Dawley大鼠，體重250～300 g，隨機(jī)分成2組：①大腦中動脈閉塞/再

3、灌注(middle cerebral artery occlusion/reperfusion，MCAO/R)組：按再灌注后不同時(shí)間點(diǎn)分為MCAO 3 h/R 6 h、MCAO 3 h/R24 h、MCAO3 h/R 48 h、MCAO 3 h/R．72 h和MCAO 3 h/R 7d五個(gè)亞組，n=6；②假手術(shù)組：按MCAO后不同時(shí)間點(diǎn)分為6 h、24 h、48 h、72 h和7 d五個(gè)亞組，n=6。MCAO/R組，按照改良的拴線法建立

4、大腦中動脈缺血再灌注動物模型；假手術(shù)組，除不插線外其余操作同缺血再灌注組。于MCAO/R后6 h、24 h、48 h、72 h、7 d采用Longa評分法、Berderson評分法、平衡木評分法3種方法進(jìn)行行為學(xué)評分；行為學(xué)評分后斷頭取腦，冠狀切除雙側(cè)嗅球和額極前部4mm，剩余大腦部分冠狀切開，前部約2 mm厚的腦組織從中線切開，分別測定左右兩側(cè)濕重，再經(jīng)過95～110℃烘干24 h后測定干重。腦組織含水量=(腦組織濕重．腦組織干重)/

5、腦組織濕重×100％；余腦組織固定后，包埋制成蠟塊，采用石蠟冠狀切片，切片厚約4μm，常規(guī)蘇木精．伊紅(HE)染色觀察大鼠腦組織的病理改變，應(yīng)用免疫組化法檢測血腫周圍腦組織不同時(shí)間點(diǎn)PDGF-BB的表達(dá)。 結(jié)果： 1.行為學(xué)評分：腦缺血再灌注后大鼠手術(shù)對側(cè)肢體存在不同程度行為學(xué)異常，其中6 h與假手術(shù)組相比無明顯差異，考慮為麻醉藥品和手術(shù)創(chuàng)傷所致，24 h后評分趨于穩(wěn)定，24"--72 h行為學(xué)異常與假手術(shù)組相比神經(jīng)功

6、能缺損明顯，提示行為學(xué)異常與腦損害程度一致，7 d時(shí)神經(jīng)功能基本恢復(fù)正常。 2.腦組織含水量測定：①M(fèi)CAO/R．組病灶側(cè)與對照組病灶側(cè)(77.62~0．174)相比，R 6 h組為79.58±0.179，P>0.05，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；R 24 h組為82.42±0.118，P<0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；R 48 h組為85.40±0.099，P<0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；R 72 h組為84.87±0.154，P<0.05，有統(tǒng)計(jì)

7、學(xué)意義；R 7 d組為80.87±1.846，P>0．05，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。②MCAO/R．組病灶同側(cè)與對側(cè)腦組織含水量相比，病灶同側(cè)腦組織含水量高于病灶對側(cè)腦組織含水量，R 6 h組病灶側(cè)為79.58±0.179，對側(cè)為78.05±0.1 17，P>0.05，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；R 24 h組病灶側(cè)為82.42±0.118，對側(cè)為78.75±0.055，P<0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；R 48 h組病灶側(cè)為85.40±0.099，對側(cè)為78.32

8、±0.094，P<0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；R 72 h組病灶側(cè)為84.87±0.154，對側(cè)為79.26±0.242，P<0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；R 7 d組病灶側(cè)為80.87±1.846，對側(cè)為79.35±0.224，P>0.05，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。③對照組各時(shí)間點(diǎn)之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差別，P>0.05。MCAO/R組到第7 d腦組織含水量逐漸回落。 3.腦組織切片HE染色觀察：假手術(shù)組無梗死灶，神經(jīng)元結(jié)構(gòu)、形態(tài)正常，無間質(zhì)水腫。MCA

9、O/R組可見缺血中心區(qū)組織疏松，形似海綿；神經(jīng)元胞體縮小，變形、核固縮；間質(zhì)水腫明顯；隨時(shí)間延長多形核白細(xì)胞(polymorphonuclearleukocyte，PMN)浸潤增多，膠質(zhì)細(xì)胞逐漸增多。其中PMN浸潤在R 72 h最明顯，R 7 d組可見膠質(zhì)細(xì)胞增生明顯。 4.腦組織PDGF-BB的表達(dá)：PDGF-BB在假手術(shù)組腦組織神經(jīng)元、室管膜和腦室脈絡(luò)叢上皮細(xì)胞有弱陽性表達(dá)。①M(fèi)CAO/R組與假手術(shù)組相比較，R 6 h組為

10、11.83±1.60，假手術(shù)組為5.52±1.78，P<0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；R 24 h組為15.67±2.07，假手術(shù)組為6.02±1.99，P<0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；R 48 h組為22.67±1.63，假手術(shù)組為5.89±1.45，P<0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；R 72 h組為25.33±2.51，假手術(shù)組為5.69±1.86，P<0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；R 7 d組為28.83±3.19，假手術(shù)組為6.13±2.01，P<0

11、.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(②)MCAO/R組內(nèi)各亞組間比較，各亞組間均有差異性，P<0.05，其中，MCAO3 h/R 6 h亞組(11.83±1.60)與MCAO 3 h/R 24 h亞組(15.67±2.07)有顯著差異性，P<0.01。 結(jié)論：腦缺血再灌注損傷誘導(dǎo)PDGF-BB的表達(dá)代償性持續(xù)性上調(diào)，PDGF-BB參加了腦缺血/再灌注后的腦細(xì)胞級聯(lián)反應(yīng)，它可以自我保護(hù)、自我調(diào)節(jié)，并可能與血管重塑有關(guān)，尤其在缺血半暗帶區(qū)，以促