銀杏苦內(nèi)酯B治療重癥急性胰腺炎的量效關(guān)系及其對(duì)PAF-R的影響.pdf

1、銀杏苦內(nèi)酯B(GinkgolideB，代號(hào)為BN52021)是血小板活化因子受體(PAF-R)的特異性拮抗劑。為“國(guó)寶”銀杏葉提取物中的萜類化合物，近年來(lái)國(guó)內(nèi)外的研究顯示該化合物治療急性胰腺炎效果顯著，但是具體的作用機(jī)制尤其是分子機(jī)制缺乏深入研究。目前應(yīng)用βN52021治療實(shí)驗(yàn)動(dòng)物重癥急性胰腺炎(SAP)給藥劑量各不相同，因此本課題對(duì)BN52021治療SAP的量效關(guān)系及其對(duì)PAF-R的影響進(jìn)行了研究。 1.BN52021治療SA

2、P的量效關(guān)系健康Wistar大鼠，80只，雌雄各半。隨機(jī)分為正常組(NC)、假手術(shù)組(SO)、模型組(SAP)、SAP+BN520211mg/kg、SAP+BN520212.5mg/kg、SAP+BN520215mg/kg、SAP+BN5202110mg/kg、SAP+善寧(20μg/kg)8組。5％牛黃膽酸鈉膽胰管微量泵逆行注射(0.1ml/kg，0.1ml/min)，誘導(dǎo)健康Wistar大鼠SAP模型。模型成功后15min，分別采用

3、1mg/kg、2.5mg/kg、5mg/kg、10mg/kg四個(gè)劑量股靜脈注射給藥治療SAP。在SAP6h時(shí)發(fā)現(xiàn)2.5mg/kg、5mg/kg、10mg/kgBN52021能夠顯著降低SAP組血漿淀粉酶、PLA2活性、腹水量，改善胰腺組織病理?yè)p傷。在1mg、2.5mg、5mg、10mg四個(gè)劑量中，1mg/kg劑量無(wú)效，5mg/kg劑量治療效果最好。 同時(shí)，應(yīng)用RT-PCR技術(shù)分別檢測(cè)不同劑量BN52021治療組胰腺組織PAF-R

4、mRNA的表達(dá)情況，分析PAF-R條帶與β-actin內(nèi)參條帶累積光密度值的比值。SAP6h時(shí)，BN520212.5mg(0.54±0.14)、5mg(0.59±0.04)、10mg(0.60±0.09)三組兩兩比較沒(méi)有顯著性差異，但三組與1mg(0.49±0.09)劑量組相比有顯著性差異。BN520212.5mg、5mg、10mg三組以及BN520211mg組與SAP6h組(0.38±0.08)相比均有顯著性差異。在改變累積光密度比值

5、方面BN520212.5-10mg沒(méi)有量效關(guān)系。 2.采用免疫組織化學(xué)方法研究PAF-R在胰腺組織的定位采用免疫組織化學(xué)方法研究PAF-R在大鼠正常胰腺組織的定位，并以PAF-R表達(dá)較高的肺組織作為石蠟切片的陽(yáng)性對(duì)照。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示在胰腺組織冰凍切片中微血管內(nèi)皮細(xì)胞PAF-R表達(dá)陽(yáng)性，與文獻(xiàn)報(bào)道一致；在石蠟切片中發(fā)現(xiàn)胰島細(xì)胞表達(dá)PAF-R，分布于細(xì)胞漿和細(xì)胞核，核膜著色較重，但是血管內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)微弱。 3.BN52021對(duì)

6、SAP大鼠胰腺組織PAF-R的影響Wistar雄性大鼠30只，隨機(jī)分為3組：假手術(shù)組(SO組)、SAP6h模型組(SAP6h組)和5mg/kgBN52021治療組(BN6h組)，各組于術(shù)后6h分別取胰腺組織應(yīng)用免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測(cè)PAF-R的變化，采用IMAGEPROPLUS圖像分析軟件分析免疫組織化學(xué)染色陽(yáng)性細(xì)胞的光密度值(density)和累積光密度值(IOD)。陽(yáng)性細(xì)胞density的變化：SO組(52.4±15.0)，SAP組(

7、103.8±4.1)，BN組(110.4±4.8)。陽(yáng)性細(xì)胞IOD的變化：SO組(5394.6±1739.4)，SAP組(1881.2±376.7)，BN組(20935.6±6511.9.1)，BN組density與SAP組相比沒(méi)有顯著性差異，但I(xiàn)OD值顯著高于SAP組。 SAP組胰腺組織PAF-RmRNA水平是動(dòng)態(tài)變化的，3h達(dá)到高峰，6h后開(kāi)始下降。BN組胰腺組織PAF-RmRNA水平也是動(dòng)態(tài)變化的，3h達(dá)到高峰，6h后開(kāi)始