毒死蜱對多巴腕能神經(jīng)元相關(guān)腦區(qū)域胚胎期發(fā)育的影響.pdf

1、毒死蜱（Chlorpyrifos，CPF）作為一種在環(huán)境中廣泛使用的有機磷農(nóng)藥，具有確定的胚胎神經(jīng)發(fā)育毒性。腦多巴胺能神經(jīng)系統(tǒng)對有機磷農(nóng)藥暴露敏感，并關(guān)聯(lián)多種認(rèn)知情感異常疾病，目前關(guān)于其在胚胎腦組織細(xì)胞中的研究還少有報道。本課題于胚胎早期暴露毒死蜱，探討其對多巴胺能神經(jīng)元相關(guān)腦區(qū)域神經(jīng)細(xì)胞的影響，并進(jìn)一步利用計算機三維重構(gòu)技術(shù)，研究對區(qū)域整體形態(tài)的影響，從宏觀與微觀層次上檢測毒死蜱的毒理效應(yīng)。
　　一、胚胎期暴露毒死蜱對紋狀體、腹

2、側(cè)被蓋區(qū)、黑質(zhì)區(qū)神經(jīng)細(xì)胞的影響:
　　在胚胎E7.5-11.5天暴露0，5mg/kg CPF，制備E14、E16、E18定時胚胎，通過定位腦組織切片和Nissl染色，對紋狀體、腹側(cè)被蓋區(qū)、黑質(zhì)區(qū)計數(shù)神經(jīng)細(xì)胞數(shù)量，進(jìn)行統(tǒng)計分析，研究結(jié)果發(fā)現(xiàn):
　　(1)紋狀體區(qū):紋狀體區(qū)觀測到神經(jīng)元呈現(xiàn)圓形、橢圓形，具有胞體，在胞體中央有大而圓的胞核，膠質(zhì)細(xì)胞表現(xiàn)為顆粒狀，形態(tài)呈現(xiàn)扁平、三角形、星形狀;毒死蜱處理后，細(xì)胞整體形態(tài)上并無顯著性改

3、變，但細(xì)胞密度與正常組相比，略微松散。
　　毒死蜱處理后E14神經(jīng)元減少12.78±0.5％，膠質(zhì)細(xì)胞減少31.93±3.0％;E16神經(jīng)元減少11.09±1.6％，膠質(zhì)細(xì)胞減少26.98±1.2％;E18神經(jīng)元減少11.0±0.5％，膠質(zhì)細(xì)胞減少22.02±1.7％。
　　(2)腹側(cè)被蓋區(qū):腹側(cè)被蓋區(qū)可以觀測到神經(jīng)元的胞體、突起，甚至可以觀察到樹突;膠質(zhì)細(xì)胞展現(xiàn)圓形、梭形狀。毒死蜱處理后，與正常組相比，細(xì)胞在整體上無明顯變

4、化。
　　毒死蜱處理后E14膠質(zhì)細(xì)胞減少34.25±2.9％;E16膠質(zhì)細(xì)胞減少27.92±4.0％;E18膠質(zhì)細(xì)胞減少12.0±1.1％，但神經(jīng)元無統(tǒng)計學(xué)差異。
　　(3)黑質(zhì)區(qū):黑質(zhì)區(qū)神經(jīng)元展現(xiàn)為橢圓形或錐形狀，突起較為明顯，胞核染色較淡;膠質(zhì)細(xì)胞具有突起，但不具備樹突與軸突，形態(tài)呈現(xiàn)梭形、圓形。毒死蜱處理后，細(xì)胞整體形態(tài)上無明顯性差異，但細(xì)胞密度與正常組相比，排列略微松散。
　　毒死蜱處理后E14神經(jīng)元減少9±1

5、.4％，膠質(zhì)細(xì)胞減少36.47±4.5％;E16神經(jīng)元減少10.09±1.7％，膠質(zhì)細(xì)胞減少32.79±3.0％;E18神經(jīng)元減少7.29±0.6％，膠質(zhì)細(xì)胞減少23.52±3.4％。
　　總體來看，胚胎期暴露毒死蜱對細(xì)胞形態(tài)無明顯影響，但明顯減少紋狀體、腹側(cè)被蓋區(qū)、黑質(zhì)區(qū)三個區(qū)域的膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)量，減少紋狀體、黑質(zhì)區(qū)的神經(jīng)元數(shù)量而對腹側(cè)被蓋區(qū)的神經(jīng)元數(shù)量無明顯影響，在兩類細(xì)胞中，毒死蜱對膠質(zhì)細(xì)胞的影響強于對神經(jīng)元的影響。
　　

6、二、毒死蜱對胚胎腦多巴胺能神經(jīng)元的影響:
　　采用TH免疫熒光染色方法，進(jìn)一步研究胚胎期暴露毒死蜱對相關(guān)腦區(qū)多巴胺能神經(jīng)元的影響，研究結(jié)果發(fā)現(xiàn):
　　1)腹側(cè)被蓋區(qū):腹側(cè)被蓋區(qū)分布大量的多巴胺能神元，排列成不規(guī)則分布，多巴胺能神經(jīng)元呈現(xiàn)橢圓形，胞體大小展現(xiàn)為中等。毒死蜱處理后，多巴胺能神經(jīng)元形態(tài)無明顯性變化。
　　毒死蜱處理后DAPI標(biāo)記細(xì)胞減少9.50±0.8％，但多巴胺能神經(jīng)元數(shù)量及TH/DAPI沒有統(tǒng)計學(xué)差異。<

7、br>　　2)黑質(zhì)區(qū):黑質(zhì)區(qū)多巴胺能神經(jīng)元密度集中，排列散亂，神經(jīng)元成錐體狀。毒死蜱處理后，神經(jīng)元整體形態(tài)上無顯著性變化，但排列與正常組相比，略微散亂。
　　毒死蜱處理后DAPI標(biāo)記的細(xì)胞減少14.24±1.5％，多巴胺能神經(jīng)元減少11.51±0.5％，TH/DAPI沒有統(tǒng)計學(xué)差異。
　　總體來看，胚胎期暴露毒死蜱對腹側(cè)被蓋區(qū)和黑質(zhì)區(qū)DAPI標(biāo)記細(xì)胞均有明顯抑制作用，對多巴胺能神經(jīng)元也有一定的抑制作用，但不改變TH/DAPI

8、比值，這說明毒死蜱對多巴胺能神經(jīng)元的抑制作用是非選擇性的。
　　三、毒死蜱對胚胎腦紋狀體三維形態(tài)的影響:
　　對E16紋狀體區(qū)域的連續(xù)切片進(jìn)行顯微拍照，經(jīng)Photoshop CC、Image Pro Plus配準(zhǔn)調(diào)整，3D Doctor三維重構(gòu)，構(gòu)建出紋狀體三維立體結(jié)構(gòu)，分析相關(guān)數(shù)值。
　　研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，E16紋狀體Control組體積為0.43mm3，CPF組為0.42mm3;Control組表面積為13.43mm2