蘋果類鈣調磷酸酶B亞基蛋白MdCBL3基因的克隆與功能鑒定.pdf

1、植物在生長過程中經常會遇到高鹽、干旱、水澇和低溫等非生物逆境脅迫。植物感知到非生物脅迫后會產生一些防御機制從而避免傷害發(fā)生。植物 CBL基因在植物響應逆境脅迫過程中發(fā)揮十分重要的作用。擬南芥中對 CBL研究較多，CBL能夠響應多種脅迫，尤其是鹽脅迫，但在果樹等木本植物中研究較少。本研究從‘嘎拉’蘋果（Malus× domestica Borkh.‘Gala’）中克隆了一個CBL基因MdCBL3（序列號：MDP0000155124），并對

2、其進行生物信息學分析，利用定量 PCR技術檢測其在不同組織和逆境條件下的表達水平。通過農桿菌介導法獲得轉基因蘋果愈傷組織、擬南芥，并對轉基因愈傷、擬南芥進行功能鑒定。旨在為進一步深入研究蘋果 CBL的功能奠定基礎。具體研究工作和結果如下：
　　1.克隆了蘋果MdCBL3基因，其由852 bp堿基組成，編碼284個氨基酸殘基的多肽鏈。基因組結構分析表明MdCBL3基因位于1號染色體上，含有8個外顯子和7個內含子。
　　2.熒光

3、定量PCR分析表明MdCBL3基因在蘋果‘嘎拉’中的表達情況，發(fā)現(xiàn)MdCBL3基因在所有組織中都有表達，在根中表達量最高。
　　3.蛋白同源比對分析顯示， MdCBL3含有3個保守的 EF手形結構域 EF-hand calcium binding motif，與擬南芥 AtCBL3蛋白序列類似，表明蘋果CBL3與擬南芥CBL3具有較高的同源性。
　　4.利用Plant Care數(shù)據(jù)庫對MdCBL3進行啟動子順式作用元件的預測

4、分析，MdCBL3啟動子序列中存在低溫、干旱、光、生長素、赤霉素、水楊酸、防御等響應元件。表明MdCBL3可能受低溫、干旱、光、激素等多種環(huán)境的調控，通過參與復雜的的生物學過程來調控其特定的生長發(fā)育過程。
　　5.熒光定量PCR分析MdCBL3基因在不同脅迫的響應，發(fā)現(xiàn)MdCBL3基因對鹽、干旱、低溫有一定的響應。
　　6.構建MdCBL3表達載體并利用農桿菌介導法侵染蘋果愈傷組織、野生型擬南芥。半定量和定量RT-PCR證明