P53在滑膜炎癥中的作用.pdf

1、[目的]：通過觀察P53與NF-κB、p38、Toll樣受體及其下游促炎癥性細(xì)胞因子之間的關(guān)系，以探討P53在滑膜炎癥中的作用，進(jìn)而揭示P53在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎發(fā)病機(jī)制中的重要作用。
　　[材料與方法]：取人膝關(guān)節(jié)滑膜組織體外培養(yǎng)滑膜成纖維樣細(xì)胞(FLS)。(1)分別用不同濃度的IL-17共同孵育24小時(shí)，收集培養(yǎng)上清行ELISA檢測(cè)細(xì)胞因子IL-6水平;同時(shí)裂解細(xì)胞收獲蛋白，利用western blot方法檢測(cè)P53的表達(dá);(2)用

2、電轉(zhuǎn)法將p53 siRNA轉(zhuǎn)入FLS細(xì)胞并設(shè)立對(duì)照，72h后收集細(xì)胞提取總蛋白檢測(cè)P53表達(dá);轉(zhuǎn)染p53-siRNA后，IL-17（0ng/ml和10ng/ml）刺激FLS24h，收集上清檢測(cè)IL-6水平，同時(shí)收集細(xì)胞提取RNA后real-time PCR檢測(cè)TLR2、TLR3、TLR4、TLR5 mRNA水平;電轉(zhuǎn)p53-siRNA和sc-siRNA后48h， IL-1740ng/ml刺激，分別于刺激0和20min收集細(xì)胞，提取總蛋白

3、檢測(cè)p-p65、p-p38。(3)不同濃度Ad-p53和Ad-lacZ（MOI為50、100、200、500和1000）分別轉(zhuǎn)染FLS24h，收集細(xì)胞提取總蛋白檢測(cè)P53。Ad-p53(MOI=100)和Ad-lacZ(MOI=100)轉(zhuǎn)染FLS24h，對(duì)照組為無腺病毒相同處理組，TL-17(10ng/ml)刺激24h，收集上清檢測(cè)IL-6水平。
　　[結(jié)果]：(1)IL-17可以抑制FLS中P53的表達(dá)，并促進(jìn)FLS分泌IL-6

4、(P＜0.05);(2)p53 siRNA可以有效抑制FLS中P53的表達(dá)。在IL-17刺激時(shí)，P53表達(dá)顯著下降的FLS分泌IL-6較對(duì)照組顯著增加(P＜0.05);(3) P53表達(dá)顯著下降的FLS中TLR2、TLR3、TLR4、TLR5的表達(dá)下降(P＜0.05);(4)在IL-17刺激下，p53 siRNA抑制P53引起P-P65和P-P38表達(dá)增高;(5)Ad-p53以MOI=100轉(zhuǎn)染FLS后，P53的表達(dá)顯著增加，IL-17