利用RP-HPLC分離小麥醇溶蛋白和高分子量谷蛋白亞基的研究.pdf

1、麥醇溶蛋白和高分子量麥谷蛋白亞基作為小麥貯藏蛋白的重要組成部分，其組成和含量對(duì)小麥面粉的烘烤品質(zhì)有重要影響。近年來隨著小麥胚乳貯藏蛋白研究的不斷深入，麥醇溶蛋白和高分子量麥谷蛋白亞基的分離純化成為熱門研究領(lǐng)域?，F(xiàn)代分子生物技術(shù)的發(fā)展以及一些先進(jìn)的分離手段的出現(xiàn)，大大促進(jìn)了小麥貯藏蛋白的研究。其中反相高效液相色譜技術(shù)的發(fā)展為我們提供了快速分離和定量分析小麥貯藏蛋白的有效方法。 本研究旨在建立小麥醇溶蛋白和高分子量麥谷蛋白亞基有效分

2、離鑒定的反相高效液相色譜法，同時(shí)分析長(zhǎng)期定位施肥下冬小麥煙優(yōu)361的麥醇溶蛋白和高分子量麥谷蛋白亞基的變化，為通過改變施肥水平提高小麥品質(zhì)，提供理論依據(jù)。 主要研究結(jié)果如下： 1．本研究系統(tǒng)分析了洗脫時(shí)間、色譜柱溫度、流速、洗脫梯度、蛋白提取方法等對(duì)利用反相高效液相色譜法分離小麥醇溶蛋白的影響，利用反相高效液相色譜柱(ZORBAX300SB-C18 Stable Band Analytical 4.6×150mm，5-M

3、icron)和Aglient 1100高效液相色譜系統(tǒng)，建立了適合我國(guó)小麥醇溶蛋白分析的反相高效液相色譜技術(shù)體系。該體系的主要參數(shù)包括：利用0.05M NaCl→H<,2>O→70％乙醇的三步提取法、柱溫60℃、流速1.0ml/min、進(jìn)樣量15ul、洗脫梯度55 min內(nèi)流動(dòng)相B的體積比由21％升到48％(v/v)。本研究結(jié)果表明，RP-HPLC可作為利用小麥醇溶蛋白鑒定不同小麥品種的可靠方法。 2．本研究系統(tǒng)分析了洗脫時(shí)間、

4、色譜柱溫度、流速、洗脫梯度等對(duì)利用反相高效液相色譜法分離小麥高分子量谷蛋白亞基的影響，利用反相高效液相色譜柱(ZORBAX300SB-C18 Stable Band Analytical 4.6x150mm，5-Micron)和Aglient 1100高效液相色譜系統(tǒng)，建立了適合我國(guó)小麥HMW-GS的反相高效液相色譜技術(shù)體系。該體系的主要參數(shù)包括：柱溫60℃、流速1.0ml/min、進(jìn)樣量15ul、洗脫梯度30 min內(nèi)流動(dòng)相B的體積比

5、由21％升到36％(v/v)。本研究結(jié)果表明，RP-HPLC可作為小麥品質(zhì)改良中優(yōu)質(zhì)亞基鑒定篩選的有力工具。 3．本研究利用反相高效液相色譜技術(shù)分析了26年長(zhǎng)期定位施肥條件下的煙優(yōu)361麥醇溶蛋白的變化，結(jié)果表明：麥醇溶蛋白的亞基組成數(shù)量不受施肥水平的影響，但是亞基含量有所差異。ω-醇溶蛋白受肥力水平的影響較小，除N<,2>PK條件使其含量降低外，其他10個(gè)處理與對(duì)照相比變化很小。丫-醇溶蛋白、α/β-醇溶蛋白受環(huán)境影響較大，在

6、N<,1>、M<,1>N<,1>、M<,1>N<,2>、M<,2>N<,1>、M<,2>N<,2>、N<,2>P、N<,2>K八種處理時(shí)蛋白含量與對(duì)照相比顯著增加，M<,2>、N<,2>PK施肥水平與對(duì)照相比能減少其含量。N<,1>施肥水平γ-醇溶蛋白增幅最大，N<,2>P處理時(shí)α/β-醇溶蛋白與對(duì)照相比增幅高達(dá)215.8％。 4．本研究利用反相高效液相色譜技術(shù)分析了26年長(zhǎng)期定位施肥條件下的煙優(yōu)361高分子量麥谷蛋白亞基的變化