Effects of Trichostatin A(TSA) on the Morphology , Proliferation of Somatic Cells and the Development of Nuclear Transfer Recon.pdf

1、近些年來(lái)，在多種染色質(zhì)調(diào)節(jié)中的組蛋白乙酰化對(duì)胚胎發(fā)育有著極其重要的作用。一些研究者的研究主要集中在胚胎的構(gòu)建和處理，然而體細(xì)胞的選擇可以顯著提高囊胚率。本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用不同濃度的組蛋白乙酰化酶抑制劑曲古菌素A對(duì)延邊黃牛體細(xì)胞處理不同時(shí)間對(duì)其形態(tài)和增值特性以及對(duì)核移植重構(gòu)胚的影響。研究結(jié)果如下：
　　1、本試驗(yàn)的目的是探討曲古菌素A（Trichostatin A,TSA）對(duì)體細(xì)胞的抑制作用影響，采用四甲基偶唑藍(lán)（MTT）法繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線

2、，并研究不同的處理時(shí)間對(duì)延邊黃牛體細(xì)胞的形態(tài)上的影響。結(jié)果表明：低濃度組（5、10ng/ml處理組）的TSA對(duì)延邊黃牛體細(xì)胞的細(xì)胞毒性作用不大，對(duì)其增殖在24h后出現(xiàn)明顯的抑制作用，但在10、25ng/ml兩濃度組中，在36h時(shí)無(wú)顯著性差異（P>0.05），這可能是由于出現(xiàn)耐藥性，隨后培養(yǎng)時(shí)間延長(zhǎng)至48h時(shí)出現(xiàn)了顯著性差異（P<0.05）。而高濃度組（25、50、100ng/ml處理組）中細(xì)胞毒性作用逐漸增大，到100ng/ml時(shí)細(xì)胞大

3、量死亡。與對(duì)照組相比TSA對(duì)延邊黃牛體細(xì)胞的增殖有明顯的抑制作用，并呈時(shí)間劑量依賴性。
　　2、不同濃度 TSA處理體細(xì)胞對(duì)重構(gòu)胚的卵裂率和囊胚率的影響。10ng/ml和25ng/ml處理組的卵裂率和囊胚率顯著高于對(duì)照組。但是兩組間在卵裂率上無(wú)顯著想差異，囊胚率25ng/ml組顯著高于10ng/ml組，結(jié)果表明最適延邊黃牛體細(xì)胞克隆的TSA濃度為25ng/ml。
　　3、探討TSA不同處理時(shí)間對(duì)核移植重構(gòu)胚的卵裂率和囊胚率的

4、影響。在12小時(shí)和24小時(shí)兩個(gè)處理時(shí)間組，卵裂率和囊胚率無(wú)顯著性差異，但是24小時(shí)的處理時(shí)間在卵裂率(70.81％,75.17% vs.66.18,P﹤0.05)和囊胚率上都好于12小時(shí)時(shí)間處理組(16.91%,17.92% vs.11.09%,P＜0.05)。
　　4、不同培養(yǎng)方法對(duì)TSA處理的體細(xì)胞重構(gòu)胚的卵裂率和囊胚率的影響。結(jié)果表明用25ng/ml的TSA處理體細(xì)胞24小時(shí)的重構(gòu)胚在隔離細(xì)胞共培養(yǎng)中的卵裂率和囊胚率略好于常