TLR2對五指山小型豬主動脈內(nèi)皮細胞炎癥因子表達的影響.pdf

1、動脈粥樣硬化(atherosclerosis,AS)被認為是一種慢性炎癥性疾病.Toll樣受體2(Toll-like receptor2，TLR2)是介導(dǎo)天然免疫反應(yīng)中的一種模式識別受體,研究表明TLR2在AS的發(fā)生發(fā)展中起著重要的作用.已證實TLR2在動脈粥樣硬化斑塊處血管內(nèi)皮細胞中高表達,且在血流動力學(xué)紊亂的部位高表達.AS發(fā)展中內(nèi)皮細胞發(fā)生功能障礙,能產(chǎn)生多種細胞因子,促進AS.本實驗旨在探討TLR2在內(nèi)皮細胞發(fā)生炎癥反應(yīng)中的作用

2、,通過LPS和TNF-α刺激內(nèi)皮細胞誘導(dǎo)TLR2高表達,并通過RNA干擾(RNA interference，RNAi)技術(shù)沉默TLR2,觀察TLR2對內(nèi)皮細胞表達炎癥因子的影響.
　　方法：采用0.1％膠原酶消化法分離3～4月齡雄性五指山小型豬的主動脈內(nèi)皮細胞,并進行體外傳代培養(yǎng),使用LPS、TNF-α和LTA分別刺激該細胞0、6、8、12和24 h，real-time PCR檢測TLR2和TLR4 mRNA表達水平;LPS和TN

3、F-α預(yù)刺激內(nèi)皮細胞24 h后,添加LTA孵育0、6和12 h,real-time PCR檢測炎癥因子IL-6、IL-8、MCP-1和黏附分子ICAM-1的mRNA表達量及ELISA檢測IL-6的分泌量.通過向內(nèi)皮細胞中轉(zhuǎn)染siRNA降低TLR2的表達,添加LTA孵育12 h,檢測內(nèi)皮細胞IL-6、IL-8、MCP-1和ICAM-1的mRNA表達量.
　　結(jié)果：分離得到的五指山小型豬主動脈內(nèi)皮細胞形態(tài)呈鋪路石樣,生長狀態(tài)良好.經(jīng)細

4、胞表面抗原鑒定證實此細胞為血管內(nèi)皮細胞.內(nèi)皮細胞未受刺激時,TLR2的表達量很低;LPS和TNF-α刺激細胞6和8 h后,TLR2表達量有所升高,12和24 h后,TLR2的表達量明顯升高(P＜0.05),而LTA刺激內(nèi)皮細胞后,TLR2的表達量未升高.未受刺激時,可檢測到內(nèi)皮細胞中TLR4的表達,而LPS和TNF-α刺激細胞后,TLR4的表達無明顯變化.LPS和TNF-α預(yù)刺激細胞24 h后,TLR2表達升高并介導(dǎo)LTA刺激內(nèi)皮細胞表

5、達IL-6、IL-8、MCP-1和ICAM-1的mRNA水平明顯升高,且細胞分泌IL-6的量升高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05).通過RNAi技術(shù)沉默TLR2后,LTA刺激內(nèi)皮細胞使IL-6、IL-8、MCP-1和ICAM-1mRNA表達量降低.
　　結(jié)論:
　　1、LPS和TNF-α誘導(dǎo)內(nèi)皮細胞TLR2的表達量升高.說明當LPS,革蘭氏陰性細菌的成分感染內(nèi)皮細胞,能引起TLR2表達升高;當單核∕巨噬細胞分泌的炎癥因子TN