超微結(jié)構(gòu)及免疫組化染色下觀察蘚化飲對(duì)金黃地鼠頰黏膜癌前病變的逆轉(zhuǎn)作用.pdf

1、目的:口腔黏膜癌前病變與口腔癌的發(fā)生密切相關(guān),近些年來(lái),為了降低口腔癌的發(fā)病率,人們?cè)絹?lái)越重視對(duì)口腔黏膜癌前病變的預(yù)防和治療。目前,口腔黏膜癌前病變的治療手段較多,主要分為藥物治療和非藥物治療。非藥物治療如手術(shù)治療、激光治療、冷凍治療等等,有著適應(yīng)證的局限性。而西藥治療如:增生平、維甲酸等等,長(zhǎng)期服用可能會(huì)出現(xiàn)一些毒副作用。近年來(lái)研究表明,中醫(yī)中藥治療口腔黏膜癌前病變顯示出明顯的臨床效果,也成為目前口腔黏膜癌前病變研究的熱點(diǎn)。本課題通過(guò)

2、建立口腔黏膜癌前病變動(dòng)物模型,應(yīng)用電鏡和免疫組化的方法觀察中藥蘚化飲對(duì)口腔黏膜癌前病變的逆轉(zhuǎn)作用。
　　 方法:選取SPF級(jí)ING敘利亞金黃地鼠55只,鼠齡六周,體質(zhì)量80g。按完全隨機(jī)設(shè)計(jì)方法將動(dòng)物分為:空白對(duì)照組5只和實(shí)驗(yàn)組50只。實(shí)驗(yàn)組用于建立口腔黏膜癌前病變動(dòng)物模型,其中又分為癌前病變對(duì)照組10只、蘚化飲治療組30只、生理鹽水治療對(duì)照組10只。將實(shí)驗(yàn)組50只動(dòng)物,頰囊黏膜涂以0.5％DMBA丙酮溶液,每周3次,連續(xù)涂藥6

3、周后,蘚化飲治療組、生理鹽水治療對(duì)照組分別灌胃治療。治療8周時(shí),各組同步取材。采用電鏡及免疫組化方法,觀察中藥蘚化飲對(duì)金黃地鼠頰黏膜癌前病變的逆轉(zhuǎn)作用。
　　 結(jié)果:
　　 1癌前病變動(dòng)物模型的建立
　　 實(shí)驗(yàn)組50只動(dòng)物頰黏膜致癌六周后,雙側(cè)頰黏膜肉眼觀全部為充血、糜爛、條索狀皺折等表現(xiàn)。隨機(jī)切取10例不同肉眼表現(xiàn)的部分病變部位,HE染色后觀察,上皮黏膜表現(xiàn)為不同程度的異常增生。由此說(shuō)明,經(jīng)DMBA丙酮溶液致癌

4、六周后,已成功建立金黃地鼠頰黏膜癌前病變的動(dòng)物模型。
　　 2蘚化飲對(duì)敘利亞金黃地鼠口腔黏膜癌前病變的逆轉(zhuǎn)作用
　　 2.1肉眼觀察
　　 空白對(duì)照組金黃地鼠頰黏膜表面光滑,呈淡粉色,透亮具有彈性,血管清晰。實(shí)驗(yàn)組50只動(dòng)物涂DMBA丙酮溶液六周后,頰黏膜變得粘連、粗糙、無(wú)彈性、充血糜爛,甚至可見條索狀皺折。中藥蘚化飲灌胃八周后,可見頰黏膜皺折減輕,黏膜表面逐漸光滑,充血糜爛面基本消失,但彈性較正常稍差。生理鹽水

5、灌胃治療八周后與治療前無(wú)明顯改變。
　　 2.2光鏡觀察
　　 空白對(duì)照組金黃地鼠頰黏膜為角化的復(fù)層鱗狀上皮,上皮和肌層之間為薄層結(jié)締組織及少量散在的纖維細(xì)胞和血管。停涂DMBA丙酮溶液八周后,鏡下觀察金黃地鼠頰黏膜可見不同程度的異常增生。中藥蘚化飲灌胃治療八周后,黏膜上皮層次逐漸清晰,上皮層數(shù)逐漸恢復(fù)正常,基底層細(xì)胞排列比較有規(guī)則,異型性的細(xì)胞減少。生理鹽水灌胃治療八周后與治療前無(wú)明顯改變。
　　 2.3掃描電

6、鏡觀察
　　 空白對(duì)照組金黃地鼠頰黏膜上皮表現(xiàn)為多邊形細(xì)胞,細(xì)胞間橋很明顯,個(gè)體細(xì)胞表面顯示很多網(wǎng)狀排列的微嵴,微嵴圍成均勻一致的小窩,整個(gè)細(xì)胞表面呈現(xiàn)一種蜂窩狀外觀。停涂DMBA丙酮溶液八周,細(xì)胞外形更不規(guī)則,細(xì)胞重疊,松解現(xiàn)象更為突出,微嵴腫脹變寬,不規(guī)則排列,呈卵石狀外觀,蜂窩狀結(jié)構(gòu)完全消失。中藥蘚化飲灌胃治療八周后,細(xì)胞外形逐漸清晰,呈現(xiàn)出多邊形。細(xì)胞表面大部分區(qū)域呈現(xiàn)蜂窩狀結(jié)構(gòu),可見連續(xù)的細(xì)胞界限。生理鹽水灌胃治療八周

7、與治療前無(wú)明顯改變。
　　 2.4透射電鏡觀察
　　 空白對(duì)照組金黃地鼠頰黏膜上皮細(xì)胞外形規(guī)則,細(xì)胞緊密相鄰,橋粒豐富,張力纖維發(fā)育正常,基底膜完整。停涂DMBA丙酮溶液八周后,可見細(xì)胞間隙增寬,橋粒大量減少,張力纖維減少,細(xì)胞外形不規(guī)則,核仁邊集,核外形不規(guī)則,核膜內(nèi)陷,可見基底膜斷裂。中藥蘚化飲灌胃治療八周后,增寬的細(xì)胞間隙逐漸減小,橋粒和張力纖維逐漸豐富,細(xì)胞外形逐漸規(guī)則。生理鹽水灌胃治療八周與治療前無(wú)明顯改變。<

8、br>　　 3蘚化飲治療后EZH2、PCNA在各組免疫組化染色結(jié)果
　　 EZH2、PCNA在空白對(duì)照組和蘚化飲治療組低表達(dá),而在癌前病變對(duì)照組和生理鹽水治療對(duì)照組高表達(dá)。癌前病變對(duì)照組EZH2、PCNA高表達(dá)率與空白對(duì)照組相比,有顯著性差異(P＜0.05);蘚化飲治療組EZH2、PCNA高表達(dá)率與癌前病變對(duì)照組相比,有顯著性差異(P＜0.05);而蘚化飲治療組EZH2、PCNA高表達(dá)率與空白對(duì)照組相比,無(wú)顯著性差異(P＞0.

9、05);生理鹽水治療對(duì)照組EZH2、PCNA高表達(dá)率與蘚化飲治療組相比,有顯著性差異(P＜0.05)。
　　 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,兩指標(biāo)表達(dá)具有相關(guān)性,表達(dá)吻合度具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)論:
　　 1使用0.5％DMBA丙酮溶液涂抹敘利亞金黃地鼠頰黏膜六周后,能成功建立金黃地鼠頰黏膜癌前病變動(dòng)物模型。
　　 2蘚化飲治療八周后,敘利亞金黃地鼠頰黏膜充血糜爛面基本消失,細(xì)胞外形逐漸清晰,上皮層異型性的細(xì)胞減少,E