大鼠非酒精性脂肪性肝病CD4+CD25+Foxp3+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞及其相關(guān)細(xì)胞因子(IL-10、TGF-β1)與胰島素抵抗的相關(guān)性研究.pdf

1、目的：通過高脂飲食建立非酒精性脂肪性肝?。∟on-alcoholic Fatty Liver Disease，NAFLD）大鼠模型，觀察大鼠體重、肝濕重、肝指數(shù)、胰島素抵抗（Insulin Resistance，IR）、血脂、肝功能和Treg及其相關(guān)細(xì)胞因子（IL-10、TGF-β1）在NAFLD形成過程中的變化，分析各項(xiàng)指標(biāo)與肝臟脂肪變性程度的相關(guān)性和Treg及其相關(guān)細(xì)胞因子（IL-10、TGF-β1）與IR程度之間的相關(guān)性。初步探討

2、Treg在NAFLD形成過程中的作用及可能的免疫學(xué)機(jī)制。
　　方法：采用同周齡的雄性SD大鼠48只，體重160士10 g，按體重隨機(jī)分為高脂組及對(duì)照組，每組24只。高脂組給予高脂飼料（88％普通飼料+2%膽固醇+10%豬油），同時(shí)對(duì)照組給予普通飼料。喂養(yǎng)至4、8、16w末時(shí)，分別從高脂組和對(duì)照組隨機(jī)抽取8只大鼠進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，用全自動(dòng)生化分析儀測定肝功能、血脂、FBS的水平；用化學(xué)發(fā)光免疫法測定FINS的水平，并計(jì)算FIRI；應(yīng)用FCM

3、測定大鼠外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg占CD4+T細(xì)胞的比例。處死大鼠后取肝臟并稱其重量，然后計(jì)算肝指數(shù)，同時(shí)觀察肝臟的顏色、質(zhì)地，取大小適中的肝組織用PBS沖洗后吸除水分，放入10%的中性甲醛溶液固定，用于HE染色；取少許肝組織用于Real-time PCR技術(shù)測定肝組織中Foxp3、IL-10和TGF-β1的表達(dá)。
　　結(jié)果：1.高脂組大鼠體重、肝濕重及肝指數(shù)于4w末時(shí)均顯著高于對(duì)照組（p分別為0.030，0.0

4、12，0.012），喂養(yǎng)至8 w、16 w末時(shí)差異更顯著（p分別為0.002，0.005，0.008；0.001，0.001，0.001）
　　2.高脂組大鼠血清ALT、AST、TC、TG在喂養(yǎng)過程中逐漸升高，4、8、16 w末時(shí)均顯著高于同期對(duì)照組（p分別為0.001，0.001，0.002，0.001；0.001，0.001，0.001，0.002；0.000，0.000，0.000，0.000）
　　3.高脂組大鼠的F

5、BS在喂養(yǎng)過程中無明顯變化，且與同期對(duì)照組相比無顯著差異（p值分別為0.621，0.282，0.195）；FINS和FIRI均在喂養(yǎng)過程中逐漸增高，4 w末時(shí)兩組比較無顯著差異（p分別為0.572，0.474），8、16 w末時(shí)均顯著高于同期對(duì)照組（p分別為0.001，0.001；0.001，0.001）
　　4.高脂組大鼠隨著喂養(yǎng)時(shí)間的延長肝組織中 Foxp3、IL-10的表達(dá)逐漸降低，均顯著低于同期對(duì)照組（p分別為0.002，

6、0.02；0.000，0.000；0.001，0.001）。4 w末高脂組大鼠肝組織中的TGF-β1表達(dá)與對(duì)照組相比無明顯差異（p=0.355），但隨著喂養(yǎng)時(shí)間的延長，高脂組大鼠肝組織中的TGF-β1表達(dá)逐漸升高，8 w、16 w末均顯著高于同期對(duì)照組（p分別為0.001，0.000）
　　5.高脂組大鼠外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg/CD4+T細(xì)胞的百分比隨喂養(yǎng)時(shí)間的延長逐漸下降，4 w、8 w、16 w末時(shí)均顯著

7、低于同期對(duì)照組（p分別為0.003，0.001，0.000）
　　6.高脂組大鼠4w末時(shí)已出現(xiàn)脂肪肝，其程度隨喂養(yǎng)時(shí)間的延長逐漸加重，第8 w末時(shí)達(dá)到中度脂肪肝，第16 w末時(shí)發(fā)展為重度脂肪肝
　　7.各項(xiàng)指標(biāo)與肝臟脂肪變性程度的相關(guān)性研究顯示，F(xiàn)BS與肝臟脂肪變性程度無明顯相關(guān)性（r=0.489）；體重、肝濕重、肝指數(shù)、TC、TG、ALT、AST、FINS、FIRI及肝組織中的 TGF-β1均與肝臟脂肪變性程度呈顯著正相關(guān)

8、（r分別為0.968、0.963、0.921、0.950、0.926、0.945、0.924、0.966、0.979、0.910），其中FIRI的相關(guān)性最大（r=0.979）；而外周血中Treg、肝組織中的Foxp3、IL-10及與肝臟脂肪變性程度呈負(fù)相關(guān)（r分別為-0.963，-0.914，-0.928），其中外周血中的Treg數(shù)量相關(guān)系數(shù)最大（r=-0.963）
　　8.Treg與Foxp3、IL-10和TGF-β1的相關(guān)性研

9、究結(jié)果顯示：肝組織中的Foxp3、IL-10與Treg呈正相關(guān)（r分別為0.872，0.839）；而肝組織中TGF-β1與外周血中Treg呈負(fù)相關(guān)（r=-0.910）
　　9.Treg及其相關(guān)因子（Foxp3、IL-10、TGF-β1）與胰島素抵抗的相關(guān)性分析結(jié)果顯示：肝組織中的TGF-β1與FIRI呈正相關(guān)（r=0.924），外周血中Treg、肝組織中Foxp3及IL-10分別與FIRI呈負(fù)相關(guān)（r分別為-0.935、-0.89

10、1、-0.936）
　　結(jié)論：1.SD大鼠給予高脂飼料持續(xù)喂養(yǎng)8 w可形成伴有IR的NAFLD
　　2.Treg數(shù)量的減少可能導(dǎo)致肝組織免疫功能異常，進(jìn)而加重IR程度，這可能是導(dǎo)致NAFLD發(fā)生發(fā)展的關(guān)鍵因素
　　3.Treg分泌的IL-10在NAFLD發(fā)展中起一定的保護(hù)作用，而TGF-β1可能起促進(jìn)作用
　　4.外周血Treg的檢測對(duì)診斷NAFLD有一定的臨床意義，通過調(diào)整Treg的數(shù)量可能阻止NAFLD的發(fā)生